尺寸排阻色谱法是基于分子尺寸不同的分析物在化学惰性的多孔固定相的孔隙中保留作用的差异实现分离的一种色谱技术。
尺寸排阻法的分离特征:
1、样品和填料不发生相互作用。
2、会否产生相互作用,取决于填料和样品,以及流动相和填料的疏水性平衡。
3、按照分子大小从大到小的顺序被洗脱。
4、比填料的最大孔径大的样品无法被分析。这个界限称为排阻限,表示色谱柱能分析的样品的大小上限。
5、排阻限所对应的色谱的洗脱容量被称为填料粒子的外部容量。用符号 Vo表示。
6、色谱柱中填料的所有微孔的容量称为填料粒子的内不容量。用符号Vi 表示。
尺寸排阻色谱柱为了方便根据待测成分的分子量来选择合适的色谱柱,按照凝胶表面孔的大小分成了很多种类。各种色谱柱的排阻界限分子量在产品目录上都有详细记录,使用的时候要按照待测样品最大分子量不超过色谱柱的排除界限分子量的规则来进行选择。另外,在不超过排除界限分子量的前提下,尽量选择排除界限分子量小的色谱柱比较合适。
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