支原体污染检测方法

一般根据支原体种类不同，采取不同的方法进行检测。目前常用的检测方法有：

1. 试剂盒检测法：

目前已有专门做支原体检测的试剂盒，可以用细胞滴片进行检测。

2. 观察细胞的形态和生长特征：

支原体污染比较严重时可出现生长减慢，有的培养基pH明显变酸，并出现细胞病变，以此可依次对支原体污染进行检测，但有些情况下支原体污染引起的病变特征与病毒感染相似，因此不能准-确诊断。

3. 分离培养法：

大多数支原体可出现*的典型菌落。因而可依次尽心检测，该方法准-确、可-靠，但时间长，敏感性不够高。

4. DNA结合荧光素染色法：

利用荧光染剂（bisbenzimide,Hoechst 33258）侦测支原体污染。荧光染料会结合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich区域，因为支原体DNA中A-T含量占多数（55～80%），所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染色后，在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之荧光小点，即为支原体之DNA，证明有支原体之污染。

5. 电子显微镜和免疫电子显微镜法：电子显微镜或者免疫电镜下对样本进行观察，此法较准-确，但受条件限制，时间长，敏感性不高。

6. 间接免疫荧光法和免疫印迹：简便、快速、特异性强。

未污染的细胞、支原体污染细胞、电镜检测

支原体污染预防及处理

组织细胞培养工作中，可以从以下几方面来预防支原体的污染：

控制环境污染；严格实验操作；细胞培养基和器材要保-证无菌；在细胞培养基中加入适量的抗生素。

当细胞被支原体污染后若由于材料的特殊性必须保留可以采用一定的抗生素进行处理，对支原体蕞有抑制活性抗生素是四环素类、大环内酯类等。目前，市场上已有了新一代支原体抗生素M-Plasmocin，能有-效的杀灭支原体，又不影响细胞本身的代谢，而且处理过的细胞不会重新感染支原体。另外，配合支原体检测试剂盒可以帮助尽快发现支原体的污染。

支原体污染后果

细胞株若受到细菌、真菌、支原体、或是特定病毒等之污染时，会严重的影响实验的结果。而细菌、真菌等之微生物污染时，较易自培养基等的外观变化察觉。但是若受到支原体之污染时，细胞之外观较无明显变化，但是其污染会造成细胞之生长速率缓慢、细胞产生病变之型态改变等等变化。