胶原酶（胶原蛋白水解酶）

一种从细菌中提取出来的酶,对胶原有很强的消化作用.适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织,它对细胞间质有较好的消化作用,对细胞本身影响不大,可使细胞与胶原成分脱离而不受伤害.该酶分离效果好,即使有钙、镁离子存在仍有活性,故可用PBS和含血清（或BSA）的培养液配制,即操作简便又可提高细胞成活率,zui终浓度200u/mL  此酶消化作用缓和,无需机械振荡。

市面卖的胶原酶一般是100mg一瓶，可以直接加100mlPBS或DMEM基础培养基（更佳）配置，浓度即为0.1%。消化大量组织，应提高浓度到0.2% 0.3%，再添加少量BSA或FBS（提高细胞活性）。

它能在生理PH和温度条件下特异性地水解天然胶原蛋白的三维螺旋结构，而不损伤其它蛋白质和组织。胶原酶的化学本质是一种蛋白质，因此，这对温度、PH和导致蛋白质变性的各种因素均非常敏感，极易受到外界条件的影响而改变其本身的构象和性质。

胶原酶（collagenase）是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的，主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬，内含较多结缔组织或胶原成分时，用胰蛋白酶解离细胞的效果较差，这时可采用胶原酶解离细胞法。 胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织，可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。常用剂量为zui终浓度200U/ml。胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞专用胶原酶，要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。

胶原酶I型 : 含有比较均匀的各种酶活力（包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性）， 主要用于上皮、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的分离。

胶原酶II型 : 含有更高的梭菌蛋白酶活性，适用于肝脏，骨，肾，甲状腺，心脏和唾液腺组织细胞的分离，更适合消化间质细胞。

胶原酶 III型： 含有较低的蛋白酶活性，常用于乳腺细胞的制备。

胶原酶IV型 ：含有低胰酶活性，通常用于胰岛细胞的制备，或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。

胶原酶V型 ：可用于胰腺小岛组织的分离，结缔组织分离。

组织量：酶液=1：3左右。

三，中性蛋白酶

中性蛋白酶只水解由亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸等疏水大分子氨基酸提供氨基的肽键。对不同氨基酸构成的肽键的水解能力，因酶的来源而异，大体是亮氨酸>苯丙氨酸>酪氨酸。

• 弹性蛋白酶，由动物的胰脏用水提取而得，也可用细菌的培养液在低温下用水提取而得。

弹性蛋白酶 可使结缔组织蛋白质中的弹性蛋白消化分解，包括肽键结合的、酰胺结合的和酯结合的进行加水分解。作用的最适pH值7.8，最适作用温度25℃。

胰蛋白酶应用广泛，特异性也差，一般用在间质少的细胞组织； 中性蛋白酶作用相对特异性，在皮肤，肠道，胃这里用的多点，比胰蛋白酶也要温和点，常与胶原酶混合消化。

以皮肤为例，胰蛋白酶既破坏桥粒也破坏半桥粒，其作用部位是基底层细胞和其上的棘层细胞，而中性蛋白酶只破坏半桥粒，不影响表皮细胞之间的连接，作用部位在基底膜Iv型胶原和纤维粘连蛋白。

对于比较难消化的组织，可以混合酶一起用。比如：胰酶和胶原酶一起用，胶原酶和弹性蛋白酶一起用。也可以先用胶原酶消化，再用胰酶短时间消化获得目的细胞。