鱼精蛋白的提取:
成熟精巢组织-均浆-硫酸酸解-NACL溶液提取-四层纱布过滤-加乙醇沉淀杂蛋白-离心-上清液-加TCA溶液沉淀-离心-鱼精蛋白硫酸盐。
鱼精蛋白的纯化:
分离提取后的鱼精蛋白必须纯化。利用鱼精蛋白的电荷和分子大小,分别采用聚丙烯酰胺等电聚焦和凝胶过滤层析手段对提取的鱼精蛋白粗提物进行纯化。在聚丙烯酰胺等电聚焦过程中,因鱼精蛋白是带正电荷的碱性蛋白质,所以聚集于碱性端,而处在中、酸性区域的蛋白质条带则为杂蛋白。聚丙烯酰胺等电聚焦完毕后,取胶板的碱性端,经扩散洗脱、透析除盐,然后进行凝胶过滤层析。当鱼精蛋白粗提物通过凝胶过滤柱时,溶液中的物质就按照不同分子量筛分开来,鱼精蛋白分子小,能够进入凝胶孔内,所以最后被洗脱出来。
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