1.简介

  微生物形体微小，极易通过各种途径入侵、扩散，目前的检疫、检测措施又难以及时发现和阻隔，而微生物入侵对人类健康、经济发展，乃至社会稳定和安全均构成严重威胁 。因此有必要对注射剂的容器密封系统完好性进行挑战性实验，确定工艺流程的稳固程度，防止微生物入侵以确保产品质量安全可靠。

  微生物侵入试验是对最终灭菌容器／密封件系统完好性的挑战性试验。在验证试验中，取输液瓶或西林瓶(小瓶)，灌装入培养基，在正常生产线上压塞、压盖灭菌。此后，将容器密封面浸入高浓度运动性菌液中，取出、培养并检查是否有微生物侵入，确认容器密封系统的完好性。此同时，需作阳性对照试验，确认培养基的促菌生长能力。

2.系统描述

  本次密封系统的完好性试验采用灌装大豆胰蛋白胨肉汤培养基，经压塞、轧盖、灭菌、微生物侵入试验，试验分为两组，A组为正常微生物侵入试验，B组为微生物挑战试验，检查产品密封可靠性是否达到要求，并对试验结果进行分析研究。

3.验证目的

  通过密封系统的完好性试验确认10ml瓶塞盖组成的密封系统完好性良好，能够保证产品能防止外界污染的工艺要求。

6.1试样制备

6.1 .1培养基的配制：用大豆胰蛋白胨肉汤培养基，按30g加1L注射用水的比例配制1.6L，胶塞、铝盖 、西林瓶121℃ 40min灭菌

6.1.2试样密封：在生产线上灌装大豆胰蛋白胨肉汤培养基（或取洁净西林瓶用洁净注射器灌装），装量为8ml/瓶，灌装130瓶，使用自动压塞和轧盖设备将西林瓶密封。

6.1.3试样灭菌：将密封后试样于121℃，15min湿热灭菌。[备注;采用加热方式进行最终灭菌，最终灭菌产品中的微生物存活概率（即无菌保证水平， SAL）不得高于10-6。 采用湿热灭菌方法进行最终灭菌的，通常标准灭菌时间F0值应当大于8分钟，

6.1.4试样预培养：从蒸汽灭菌器中取出试样，冷却，将每一试样倒转，使培养基与西林瓶内表面充分接触，在30～35℃下竖放培养14天。

6.1.5 B组试样培养：小心拧松至少50个试样的铝盖，注意不要破坏其密封口，将拧松铝盖时不慎损坏西林瓶密封性的所有试样剔除；同时挑选至少10个封口处缺损的西林瓶；两者标记后在30～35℃下倒转竖放培养14天。