蔗糖转化酶(Invertase,Ivr)催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据*适 pH,将高等植物Ivr分为酸性转化酶(AI)和中性转化酶(NI)两种类型。AI主要存在于细胞液泡或自由空间中,*适 pH 为4.5~5.0(酸性),通过降解液泡中蔗糖,调节液泡中蔗糖的利用和果实内糖类的积累。AI催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范围内510nm光吸收增加速率与AI活性成正比。
酸性转化酶(AI)的活性计算如下:
标准条件下测定的回归方程为y=0.0016x-0.001;x为标准品浓度(µg/mL),y为吸光值。
(1)按蛋白浓度计算
单位定义:37℃每mg蛋白每分钟产生1µg还原糖定义为一个酶活性单位。
NI活性(U/mg prot)=[(ΔA+0.001)÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr)÷T=20.8×(ΔA+0.001) ÷Cpr
(2)按鲜重计算
单位定义:37℃每g组织每分钟产生1µg还原糖定义为一个酶活性单位。
NI活性(U/g)=[(ΔA+0.001)÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=20.8×(ΔA+0.001) ÷W
V1:加入反应体系中样本体积,0.2mL;V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;T:反应时间:30min。
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