细胞培养基的操作过程您了解吗?

　　细胞培养基是人工模拟细胞在体内成长的养分环境，是供应细胞养分和促进细胞成长增殖的物质基础。培育液或培育基的含义简直相同，英文都是medium。当它是粉剂时，倾向性地称为培育基，而将粉剂配成液体后，多称为培育液。培育液中常常补加血清、抗生素等成分。

　　过程：

　　一、复苏

　　1.把冻存管从液氮中取出来，当即投入37℃水浴锅中，轻微摇晃。液体都融化后(大约1-1.5分钟)，拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

　　2.把上述细胞悬液吸到装10ml培育基的15ml的离心管中(用培育基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来)，1000转离心5分钟。

　　3.把上清液倒掉，加1ml培育基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培育基的10cm培育皿中前后左右轻轻摇晃，使培育皿中的细胞均匀分布。

　　4.标好细胞品种和日期、培育人姓名等，放到CO2培育箱中培育，细胞贴壁后换培育基。

　　5.3天换一次培育基。

　　二、传代

　　1.培育皿中的细胞覆盖率到达80%-90%时要传代。

　　2.把原有培育基吸掉。

　　3.加恰当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行)，消化1-2分钟。

　　4.细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培育基终止消化。

　　5.用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。

　　6.把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。

　　7.倒掉上清液，加1-2ml培育基，把细胞都吹起来。

　　8.依据细胞品种把细胞传到几个培育皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个，继续培育。

　　三、冻存

　　把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，中止几分钟，写明细胞品种，冻存日期4℃30min，-20℃30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。

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