冰冻切片神经纤维比耳朔夫斯基（Bielschowsky）银染试剂盒

MB80018.2 v.A

  冰冻切片神经纤维比耳朔夫斯基（Bielschowsky）银染试剂盒产品说明书

（中文版）

主要用途

  冰冻切片神经纤维比耳朔夫斯基（Bielschowsky）银染试剂是一种旨在使用银还原技术，分析固定处理的冰冻组织切片中神经纤维、轴突、神经原纤维缠结和老年斑形态学的*而经典的技术方法。该技术经过精心改良比耳索夫斯基（Bielschowsky）方法、成功实验证明的。主要适用于冰冻脑组织或外周神经组织切片的相关纤维组织检测。广泛用于动物脑神经病理生理解剖学的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。

技术背景

神经纤维对于银离子敏感。通过嗜银染色，神经纤维还原离子银为可见金属银沉积，呈现黑色。

产品内容

  清理液（Reagent A）  120毫升

  固着液（Reagent B）   10毫升

  染色液（Reagent C）   20毫升

  中和液（Reagent D）   20毫升

  显色液A（Reagent E）    5毫升

  显色液B（Reagent F）    5毫升

  终止液（Reagent G）    5毫升

  平衡液（Reagent H）    5毫升

  补水液A（Reagent I）    5毫升

  补水液B（Reagent J）    5毫升

  净化液（Reagent K）    5毫升

产品说明书    1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，避免光照；试剂具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月

用户自备

小型玻璃染色缸：用于冰冻切片染色操作的容器

中性树脂：用于切片封片

光学显微镜：用于切片染色后观察分析

实验步骤

• 样本固着处理

• 取出待测的10微米厚的冰冻组织切片 
• 小心加上200微升  清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个样品表面
• 小心移去切片上的  清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升  固着液（Reagent B），铺满整个样品表面
• 室温下，孵育10分钟
• 小心移去切片上的  固着液（Reagent B）
• 小心加上200微升  清理液（Reagent A），清洗样品表面
• 小心移去切片上的  清理液（Reagent A）
• 重复实验步骤7至8一次

二、 样本染色处理

• 小心加上200微升  染色液（Reagent C），铺满整个切片样品表面
• 室温下至少孵育15分钟（注意：可见切片呈现浅棕色）
• 小心移去切片上的  染色液（Reagent C）
• 室温下，小心将切片置入50毫升  清理液（Reagent A）中孵育2分钟
• 小心移去切片上的  清理液（Reagent A）
• 移取1毫升  染色液（Reagent C）到5毫升玻璃管里
• 一滴一滴（25微升一次）加入  中和液（Reagent D），直至溶液澄清，标记为  染色强化液
• 小心加上200微升上述  染色强化液，铺满整个切片样品表面
• 室温下至少孵育30分钟，直至切片呈现深棕色
• 小心移去切片上的  染色强化液

三、 样本显色处理

• 准备1个1.5毫升离心管
• 加入100微升  显色液A（Reagent E）和100微升  显色液B（Reagent F），混匀，标记为  显色工作液
• 小心加上200微升  显色工作液在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育10分钟，直至出现黑色为止（注意：显微镜下观察后继续下列操作）
• 即刻移去切片上的  显色工作液
• 即刻加上100微升  终止液（Reagent G）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育1分钟
• 小心移去切片上的  终止液（Reagent G）
• 室温下，小心将切片置入50毫升  清理液（Reagent A）中孵育2分钟
• 小心移去切片上的  清理液（Reagent A）
• 即刻加上100微升  平衡液（Reagent H）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育5分钟
• 小心移去切片上的  平衡液（Reagent H）
• 室温下，小心将切片置入50毫升  清理液（Reagent A）中孵育2分钟
• 小心移去切片上的  清理液（Reagent A）
• 小心加上100微升  补水液A（Reagent I）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 小心移去切片上的  补水液A（Reagent I）
• 小心加上100微升  补水液B（Reagent J）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 小心移去切片上的  补水液B（Reagent J）
• 小心加上100微升  净化液（Reagent K）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 小心移去切片上的  净化液（Reagent K）
• 放上盖玻片或封片（中性树脂）
• 即刻在一般光学显微镜下观察：神经纤维、轴突、神经原纤维缠结和老年斑呈现金黑色，切片背景呈现黄色或棕色

注意事项

• 本产品为50次操作
• 操作时，须戴手套
• 试剂具有腐蚀性，注意操作安全
• 建议使用玻璃染色缸
• 加入  中和液（Reagent D），须达到饱和状态，临饱和前，加10微升，混匀后可见黄褐色；再加10微升，混匀后澄清为止。不宜多加，如果多加，可以回加  染色液（Reagent C） 
• 每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干
• 试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面
• 样品染色避免过度
• 使用  显色工作液时，有时反应短至2至5分钟之内，总之以出现黑色为准，通过显微镜观察确定
• 染色完成后，即刻进行光学显微镜观察 
• 样品染色后保存，避免光照
• 本公司提供系列组织细胞神经系统成分染色试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定显色清晰