可在母种试管灌入无菌液体石蜡,注入量以浸没斜面上方1厘米左右为宜,使菌丝与空气隔绝,降低活力容。然后棉塞处包扎薄膜,棉塞向上直立放于干燥器中(室温)或4℃的冰箱中保藏,一般可以保藏1~2年。
化学纯的液体石蜡:在121℃下高温灭菌30分钟,再将液体石蜡在160℃烘箱中保温1~2小时,蒸发掉液体石蜡中的水分。或将高压灭菌后的液体石蜡放置在40~60℃温箱中,使灭菌后的液体石蜡层由乳白色变成无色透明。在无菌条件下,将灭菌除水的液体石蜡用无菌吸管罐到长满菌丝的斜面试管中,液体石蜡要高出斜面顶端1.0厘米左右,然后用无菌硅胶塞塞好,直立地放在试管架上或罐头瓶中,置于冰箱或室温中保藏。液体石蜡灌注过多,移种时不方便;过少则容易干涸。在保藏中,如液体石蜡减少,斜面露出时,应及时以无菌操作方式补充液体石蜡。
从液蜡保藏中移出菌种时,可不必倒出液蜡,只需用接种铲从斜面上铲取一小块菌丝块,取出的菌丝块因沾有液蜡,菌丝生长势弱,需再移转新试管1~2次后,才能恢复正常生长。移接时应避免与火焰接触,以免液蜡燃烧。移接后,原保藏菌种仍可重新封口保藏。
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