H2S含量测定试剂盒说明书 微量法
注意:正式测定之前选择预期差异大的样本做预实验
规格: 100T/96S
产品内容:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。
试剂四:液体 1mL×1 管,4℃避光保存。
标准品:粉剂 3mg×1 管,4℃避光保存
产品说明:
H2S 是一种新型气态信号分子,存在于脑内的神经递质,生理浓度的 H2S 对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用,并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。
H2S 与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝,亚甲基蓝在 665nm 处有D吸收峰,通过测定其吸光值可计算 H2S 含量。
需自备的仪器和用品:
天平、低温离心机、可见分光光度计或酶标仪、微量比色皿或96孔板、蒸馏水。
操作步骤:
一、样品处理:
a. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
b. 细菌、真菌:按照细胞数量(10 4 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
c. 血清(浆):直接测定。
二、测定步骤: (取 1.5ml 离心管,按照下表操作)
| 空白管 | 测定管 | 标准管 |
样品(μL) |
| 50 | 50 |
蒸馏水(μL) | 50 |
|
|
d. 临用前将标准品加入1ml试剂一充分溶解则为12.5μmol /mL H2S标准品溶液,稀释100倍后为0.125μmol /mL标准品溶液
试剂一(μL) | 50 | 50 | 50 |
充分震荡混匀 | |||
| |||
试剂二(μL) | 50 | 50 | 50 |
充分震荡混匀 | |||
试剂三(μL) | 50 | 50 | 50 |
充分震荡混匀 | |||
试剂四(μL) | 10 | 10 | 10 |
12000rpm,4℃,离心 10min,取200μl上清混匀,25℃静置20min,于比色皿中,测定665nm吸光值,记为A空白、A测定、A标准。 |
三、H2S 含量计算公式:
- 按蛋白浓度计算
H2S含量(μmol /mg prot)=0.125×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白) ÷Cpr
- 按样本质量计算
H2S含量(μmol /g)=0.125×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白) ÷W
- 按细胞数量计算
H2S含量(μmol /104 cell)=0.125×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) ÷细胞数量
- 按照液体体积计算
H2S含量(μmol /mL)=0.125×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)
注意事项:如样本OD值大于标准品OD,可稀释样本或增大标准品浓度
细胞划痕https://www.chem17.com/st166210/product_2889093.html
动物实验https://www.chem17.com/st166210/product_2720588.html
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