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木质素（Lignin ）含量试剂盒说明书

来源：青岛捷世康生物科技有限公司 2020年09月28日 11:42

微量法

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

木质素是构成植物细胞壁的成分之一，是由聚合的芳香醇构成的一类物质，存在于木质组织中，主要作用是通过形成交织网来硬化细胞壁。木质素主要位于纤维素纤维之间，起抗压作用。

测定原理

木质素中的酚羟基发生乙酰化后在 280nm 处有特征吸收峰，280nm 的吸光值高低与木质素含量正相关。

需自备的仪器和用品

天平、40 目筛，玻璃试管、烧杯、离心机，恒温水浴锅、烘箱、封口膜、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、高氯酸。

试剂组成和配制

试剂一：液体 50mL×2 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 100mL×2 瓶，4℃保存。

样品处理

样品 80℃烘干至恒重，粉碎，过 40 目筛，称取约 5mg（记为 W）于 10mL 玻璃试管中（务*玻璃试管，不可用 Ep 管）

测定操作表

	空白管	测定管
样本（mg）		5
试剂一（μL）	1000	1000
高氯酸（μL）	40	40
于 10mL 玻璃试管中，用封口膜密封，充分混匀，80℃水浴 40min，每隔 10min 震荡一次，然后自然冷却
试剂二（μL）	1000	1000
充分混匀
上清（μL）	40	40
试剂三（μL）	1960（参照注意事项四）	1960（参照注意事项四）
取 200ul 于微量石英比色皿或者96孔板，测定 280nm处吸光值 A。分别记为 A 空白管和 A 测定管，ΔA=A 测定管-A 空白管

计算公式

用微量石英比色皿计算公式如下：

标准曲线：y = 0.02776x+0.0068，R² =0.9889

Lignin（mg/g 干重）= (ΔA-0.0068)÷0.02776×V 反总×10 ^-3 ÷W×T

=0.0735×(ΔA-0.0068) ÷W×T

V 反总：反应总体积：2.04mL；W：样本质量，g；T：稀释倍数

用 96 孔板计算公式如下：

标准曲线：y = 0.01388x+0.0034，R² =0.9889

Lignin（mg/g 干重）= (ΔA-0.0034)÷0.01388×V 反总×10 ^-3 ÷W×T

=0.1470×(ΔA-0.0034) ÷W×T

V 反总：反应总体积：2.04mL；W：样本质量，g；T：稀释倍数

注意事项

1. 试剂一有毒性，请操作时做好防护措施，加热前必须用封口膜密封，以防气体溢出。

2. 加热过程中有剧烈反应，震荡时轻摇，以免压力过大喷出造成人身伤害。

3. 试剂三具有强刺激性，建议操作过程全部在通风橱子操作。

4. 取上清加试剂三步骤根据自己样品乙酰化程度，试剂三的用量可调整，保证吸光值在0.1-0.8之间即可，并在公式中参与计算。

5.乙酰化测定木质素含量如受到实验环境的影响，可自行制作标准曲线。

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