随着高效液相色谐的快速发展，各种新的色谱技术不断涌现。其中，反相高效液相色谱因其良好的选择性，应用的范围不断扩大，显示出很好的应用前景。

   反相高效液相色谱是化学键合相色谱法的一种。化学键合相色谱法是由液液色谱法发展起米的，是为了解决在分离过程中，机械吸附在载体上的固体液的流失问题而发展出来的一-种新方法。 键合相色谱法通过将不同的有机官能团通过化学反应共价键合到硅胶载体表面的游离羟基上，而生成化学键合固定相。化学键合周定相对各种极性溶剂都有良好的化学稳定性和热稳定性。由它制备的色谱主柱效高、使用寿命长、重现性好，儿乎对各种类型的有机化合物都呈现良好的选择性，并可用于梯度洗脱操作，消除了分配色谱法的缺点。

   根据键合固定相和流动相相对极性的强弱，可将键合色谱法分为正相键合色谱法和反相键合色谱法。反相键合色谱法即反相高效液相色谱。在正相键合色谱法中，键合固定相的极性大于流动相的极性，适用于分离油溶性或水溶性的极性和强极性化合物。在反相键合相色谓法中，键合固定相的极性小于流动相的极性，适用于分离非极性、极性或离子型化合物，其应用范围也比正相键合相色谱法更广泛。

    在反相健合相色请法中伸用的是非极性键合固定相。它是将全多孔(或薄光)微粒硅胶载体，经酸活化处理后与含羟基链或苯基的硅烷化试剂反应，生成表面具有烷基或苯基的非极性固定相。如共价结合到载体上的直链碳氢化合物正辛基等。

关于反相色谱的分离机理，吸附色谱的作用制认为溶质在固定相上的保留主要是疏水作用，在高效液相色谱中义被称为疏溶剂作用。根据疏溶剂理论，当溶质分子进入极性流动相后，即占据流动相中相应的空间，而排挤一部分溶剂分子。当溶质分子被流动相推动与因定相接触时，溶质分子的非极性部分或非极性因子会将非极性固定相上附着的溶剂膜排挤开，而直接与非极性同定相上的烷基官能团相结合(吸附)形成缔合络合物，构成单分子吸附层。这种疏溶剂的吸附作用是可逆的，当流动相极性减少时，这种疏溶剂斥力下降，会发生解缔，并将溶质分子解放而被洗脱下米。

    反相色谱中疏水性越强的化合物越容易从流动相中挤出去，在色谱柱中滞留时间也长，所以反相色谱法中不同的化合物根据它们的疏水特性得到分离。反相色谱法适于分离带有不同疏水基团的化合物，亦即非极性基团的化合物。此外，反相色谱法可用于分离带有不同极性基团的化合物。可以通过改变流动相的溶剂及其组成和pH，以影响溶质分子与流动相的相互作用，改变它们的滞留行为。另外，反相色谱中水的流动相中占的比例伸缩性很大，可以从0-100%，从而使反相色谱可用于水溶性、脂溶性化合物的分离。反相色谐法中的固定相是被共价结合到硅胶载体上的直链饱和烷烃，其链的长短不同，长的是十八烷基，这也是使用得多的固定相。直链饱和烷烃疏水特性随着碳氢链的长度而增加，在反相色谱柱中溶质由于疏水作用而滞留的时间也将随着碳氢链的长度而增加。在一般情况下这意味着用碳氢链长的反相色谐柱能得到较好的分辨率，在多数情况下是依靠反复试验选择色谱柱。由丁反相色谱法的固定相是疏水的碳氢化合物，溶质与固定相之间的作用主要是非极性相互作用，或者说疏水相互作用，因此溶剂的强度随着极性降低而增加。