PCR(Polymerase Chain Reaction),是指在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以特定引物为延伸起点。通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。
防止污染的首要原则是要设置NTC(No Template Contro|)对照,一个不含有模板DNA但含有PCR体系中所有其他成分的对照。如果不能在污染的第一时间发现,会导致后续一系列的数据无法使用。准备PCR体系的移液器要,千万不能用吸取过PCR产物的移液器去准备PCR体系。
经典的PCR扩增反应分为三步:
1、高温变性:模板DNA经加热至95℃左右一定时间后,使模板DNA双链解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;
2、低温退火:模板DNA与引物的复性,模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
3、适温延伸:DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶的作用下,以核苷酸为反应原料,靶序列为模板,按碱基互补配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。
影响扩增的因素:
1、由于各种原因,造成的PCR扩增体系中出现了非目的检测样本本身的模板,使得PCR结果出现假阳性
2、操作错误或者误差造成的模板间交叉污染
3、PCR试剂的污染
4、PCR实验器材的污染
5、PCR扩增产物的气溶胶污染
防止污染的首要原则是要设置NTC(No Template Contro|)对照,一个不含有模板DNA但含有PCR体系中所有其他成分的对照。如果不能在污染的第一时间发现,会导致后续一系列的数据无法使用。准备PCR体系的移液器要,千万不能用吸取过PCR产物的移液器去准备PCR体系。
免责声明
- 凡本网注明“来源:化工仪器网”的所有作品,均为浙江兴旺宝明通网络有限公司-化工仪器网合法拥有版权或有权使用的作品,未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的,应在授权范围内使用,并注明“来源:化工仪器网”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。
- 本网转载并注明自其他来源(非化工仪器网)的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品第一来源,并自负版权等法律责任。
- 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起一周内与本网联系,否则视为放弃相关权利。