真菌/酵母细胞样品细胞周期SYTOX绿色荧光流式细胞分析试剂盒

真菌/酵母细胞样品细胞周期SYTOX绿色荧光流式细胞分析试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

  真菌/酵母细胞样品细胞周期SYTOX绿色荧光流式细胞分析试剂是一种旨在通过细胞流式仪测定真菌/酵母细胞中DNA结合SYTOX绿色染料程度，来定量DNA含量，以进一步获取细胞周期分布状况的*而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种真菌/酵母细胞，包括芽殖酵母、裂殖酵母等的细胞周期分析。可以被用于细胞凋亡、信号传递、细胞分裂、代谢等的研究。产品严格无菌，即到即用，分辨率高，操作简捷，性能稳定。

技术背景

芽殖酵母（Saccharomyces cerevisiae）、裂殖酵母（Schizosacchromyces pombe）是研究真核生物细胞周期的模式生物。细胞周期是评价细胞代谢、生理和病理状况的重要指标。通过DNA结合染料，借助细胞流式仪，测定出DNA含量，根据DNA含量随着细胞周期的不同而发生变化，来确定和区别细胞周期的不同阶段。流式细胞术（FLOW CYTOMETRY）是七十年代发展起来的集计算机、激光、流体力学、细胞化学、细胞免疫学为一体的高科学技术。凋亡细胞是在正常G0/G1峰细胞群前出现亚二倍体峰（sub-G1）细胞群。SYTOX绿色染料具有不受细胞数量变化、染料浓度变化、细胞形态和大小变化，以及细胞培养液不同等影响，且不易渗漏等优点。

产品内容

  清理液（Reagent A）     毫升

  固着液（Reagent B）     毫升

  抗干扰液（Reagent C）     毫升

  酶解液（Reagent D）     毫升

  染色液（Reagent E）     毫升

产品说明书     1份

保存方法

保存  抗干扰液（Reagent C）、  酶解液（Reagent D）和  染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；  染色液（Reagent E）避免光照，有效保证6月

用户自备

15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

2毫升离心管：用于细胞染色的容器

（微型）台式离心机：用于样品操作操作

培养箱或恒温水槽：用于反应孵育

细胞流式仪：用于细胞荧光分析

实验步骤

• 准备好5 X 10⁶的待测真菌/酵母细胞 
• 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g
• 小心抽去上清液
• 加入xx毫升  清理液（Reagent A）到15毫升锥形离心管，混匀
• 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g 
• 小心抽去上清液
• 缓慢加入xx毫升预冷的  固着液（Reagent B），且涡旋震荡混匀
• 放进4℃冰箱里孵育16小时
• 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g 
• 小心抽去固着液
• 加入xx毫升  清理液（Reagent A）到15毫升锥形离心管，混匀
• 移入到2毫升离心管
• 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g
• 重复清洗一次
• 加入xx微升  抗干扰液（Reagent C），混匀
• 放进37℃恒温水槽，孵育2至16小时
• 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g
• 加入xx微升  酶解液（Reagent D），混匀
• 放进37℃恒温水槽，孵育20分钟
• 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g
• 加入xx微升  清理液（Reagent A），混匀
• 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g 
• 小心抽去上清液
• 加入xx微升  染色液（Reagent D），混匀细胞颗粒群
• 超声处理100瓦，30%功率，15秒
• 在暗室里37℃培养箱里孵育30分钟
• 移入到细胞流式仪测试管（可放进4℃冰箱里待测）
• 即刻进行细胞流式仪分析：波长488nm氩离子激光出现绿色荧光（或488nm激发波长，530nm散发波长），观察50000个细胞以上

注意事项

• 本产品为50次操作
• 操作时，须戴手套
• 孵育时，必须避免光照
• 建议细胞染色完成后，即刻进行细胞流式仪分析。如果放进4℃冰箱里待测，不要超过1周
• 细胞流式仪分析前，须混匀内容物，或超声处理，避免细胞成团
• 细胞检测量不得少于10000个
• 告知流式仪技术员有关细胞类型
• 使用未经染色的细胞进行FSC与SSC设定，然后将染色细胞调整到未经染色细胞的水平，包括FL1、FL2、FL3的PMT
• 建议设定：

Detector FSC E00  Gain：2

Detector FL1-A Voltage：400  Gain：4

流速：500/秒

• 本公司提供系列细胞周期分析试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定荧光清晰