1. 脱蜡：切片放入二甲苯1，二甲苯2，二甲苯3，各10分钟，无水乙醇1，无水乙醇2，无水乙醇3各2分钟，流水冲洗5分钟。
2. 修复：高压锅内加入2000毫升柠檬酸钠修复液，加热至沸腾后将切片放入并加盖，压力阀转动后开始计时3分钟，自然冷却至室温。
3. 洗涤：Pbs洗涤3次，每次5分钟。
4. 阻断：3%过氧化氢室温阻断10分钟。
5. 洗涤：Pbs洗涤3次，每次5分钟。
6. 封闭：2.5%山羊血清室温封闭1小时，甩去封闭液再加入一抗，4度过夜。
7. 洗涤：Pbs洗涤3次，每次5分钟。
8. 二抗：加入对应二抗，室温孵育30分钟。
9. 洗涤：Pbs洗涤3次，每次5分钟。
10. 显色：dab显色1-2分钟，显微镜下观察至有明显阳性，用去离子水终止反应。
11. 复染：苏木素复染2分钟，再用流水冲洗。
12. 分化：盐酸乙醇分化1-2秒，再用流水冲洗。
13. 蓝化：稀氨水蓝化10秒，再用流水冲洗。
14. 脱水：75%乙醇，85%乙醇，95%乙醇，无水乙醇1，无水乙醇2梯度脱水，每次5分钟。
15. 透明：二甲苯1，二甲苯2，二甲苯3透明，每次5分钟。
16. 封片：中性树胶封片后，烘箱中烤干，显微镜下观察。

实验试剂

1，柠檬酸钠修复液     货号：自配液

2，PBS                货号：自配液

3，山羊抗兔二抗       货号：vector mp-7452

4，dab                货号：中杉金桥 zli-9018

一抗：

α-sma                货号：ab124964             实验比例：1:1000