流式细胞仪检测A172细胞周期的实验报告

一、 实验仪器与试剂

表格一：实验仪器

表格二：试剂

二、 实验步骤

细胞培养 取对数生长期的 A172 细胞，按 1*105个/mL 以 1mL 体积接种于 6 孔板内。无抗生素培养液培养过夜,到转染时使细胞达到 70％的汇合率。

转染

将 12.5uL siRNA 溶于 387.5uL 无血清的 DMEM 中,混合均匀。

将 12.5uL Lipofectamine 2000 溶于 387.5uL 无血清的 DMEM 中，混合均

匀。在室温下孵育 5 分钟。

将上述两种混合物混合（总体积 800uL）,轻轻混合均匀在室温下孵育

20 分钟形成复合物。

在 6 孔板中每孔加入 800uL 复合物。十字法混合均匀。

细胞在 37℃、5%CO2培养箱中培养 6h 后弃上清液,并加入 10％胎牛血

清的 DMEM 培养液。

固定

培养 48h 后小心吸去上清，胰酶消化并离心收集细胞（1000rpm/min），弃上清，用预冷 PBS 洗细胞 2 次，加入预冷 70％乙醇， -20℃固定保存。

染色

离心，弃上清；

1mL PBS 洗 1 次，离心；

加入 10uL RNase A（20ug/mL）于 500uL PBS, 37 度 30min 孵育后，离心；

PBS 洗 1 次，离心；

加 10uL PI (50 ug/mL)于 500 uL PBS，室温避光 30min。  

检测

以标准程序用流式细胞仪检测，汞激发波长 488nm，计数 1 万个细胞，结果

使用 Modfit 软件分析。

三、 实验结果

省略