流式细胞仪检测A172细胞凋亡的实验报告实验报告书

流式细胞仪检测A172细胞凋亡的实验报告实验报告书 

一、 实验仪器与试剂 

表格一：实验仪器 

表格二：试剂 

二、 实验步骤 

细胞培养 取对数生长期的 A172 细胞，按 1*105个/mL 以 1mL 体积接种于 6 孔板内。无抗生素培养液培养过夜,到转染时使细胞达到 70％的汇合率。 

转染 

将 12.5uL siRNA 溶于 387.5uL 无血清的 DMEM 中,混合均匀。 

将 12.5uL Lipofectamine 2000 溶于 387.5uL 无血清的 DMEM 中，混合均

匀。在室温下孵育 5 分钟。 

将上述两种混合物混合（总体积 800uL）,轻轻混合均匀在室温下孵育

20 分钟形成复合物。 

在 6 孔板中每孔加入 800uL 复合物。十字法混合均匀。 

细胞在 37℃、5%CO2培养箱中培养 6h 后弃上清液,并加入 10％胎牛血

清的 DMEM 培养液。 

染色 消化并离心收集细胞（1000rpm/min）后弃上清，加入无钙、镁 PBS 1mL 洗

2 次，离心后弃上清。分别加入 100μL binding buffer、5μL Annexin V-FITC 和 5μL

PI 溶液，室温避光孵育 15min。 

4. 检测 

加入 400μL binding buffer 后以标准程序用流式细胞仪检测，汞激发波长

488nm，计数 1 万个细胞。 

三、 实验结果 

省略