特殊生物的超低温保存法

 1.大多数微生物可用超低温保存，超低温保存法是适用范围广的微生物保存法：

 通常可用超低温的方法保存（ATCC 1983；Halliday，Baker 1985）。此法是将冻存在小管或安瓿里的细胞以较慢的冷冻速率（1℃／分钟）冷冻，直至—150℃，再将这些小管贮存在—150～－196℃的液氮中。

   超低温保藏的微生物必须始终贮存在温度非常低的环境中，因此需要液氮罐。

在长期贮存的过程中必须经常注意补充液氮。这种贮存方式比冻干法需要更多的经费，包括为了维持贮存温度所必要的劳动力和液氮等。
2 材料
  病毒超低温保存所需材料有：热收缩塑料管（Nunc Cryoflex），液氮罐，防护手套和面罩，久性记号笔，气体喷灯，装液氮的保温瓶。
3 方法
  （1）剪一段两端各超出冷冻管长度2cm 的热收缩塑料管。
  （2）将含有澄清病毒悬液（组织培养的上清培养基，或组织培养基内的细胞溶解产物均可）冰浴几分钟，用灭菌移液管将0.2ml 冰浴过的上清悬液分装到冷冻管内，并将盖子拧紧。
  （3）将有病毒的冷冻管放入热收缩塑料管中部，插入正确的标签。
  （4）用喷灯小心加热热收缩塑料管，并使之包住冷冻管。注意不要用太高的温度加热热收缩塑料管。

  （5）再小心加热热收缩塑料管的两端，用大号镊子夹紧管的端口至*密封。
  （6）将密封好的冷冻管快速在装有液氮的保温瓶中冷冻（操作时要求戴面罩和手套）。
  （7）将冷冻过的冷冻管放入液氮罐中的格子内，同时记录样品的详细的存放位置、实验编号和存放日期等。
  （8）需要用时，迅速从液氮罐内取出所需样品，并投入37℃水浴箱中解冻后，用解剖刀片在冷冻管的硅化垫圈处切开热收缩塑料管。拧开冷冻管的盖子时不需要除去热收缩塑料管。