体液钙离子浓度比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

 体液钙离子浓度比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

 体液钙离子浓度比色法定量检测试剂是一种旨在通过邻甲酚酞络合酮，在碱性条件下与钙离子反应产生紫蓝色复合物，在分光光度仪下通过吸光峰值的变化，即采用比色法来测定样品中总钙离子浓度的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种体液包括血浆、血清、尿液、脑脊液、唾液、精液等样品中总钙离子的浓度检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。

技术背景

钙是人体中的一种重要电介质和矿物质，占1150克。其中99％的钙以氟磷灰石钙（calcium fluorophosphate apatite）形式存在于骨组织中。非骨组织钙成分主要存在于细胞内。钙具有两种主要形式：一种是非弥散型蛋白结合钙，其构成约40％至50％的血清中的总钙含量；另一种为弥散型游离钙，其进一步分成具有活性的复合钙（complexed calcium）和离子钙（ionized calcium）。钙对神经肌肉兴奋性（neuromuscular excitability）、血液凝固、酶的激活、离子跨膜运输、释放神经传导介质、信使传导等方面起着重要作用。钙的检测包括沉淀法、EDTA鳌合滴定法、火焰光度法（flame photometry）、原子吸收分光光度法等技术，但容易受到钠、钾、磷酸盐、硫酸盐的干扰，或者受限于仪器的特殊的要求。邻甲酚酞络合酮（o-cresolphthalein complexone；CPC）比色法是一种稳定、简便、准确的钙检测技术。钙与邻甲酚酞络合酮，在碱性条件下反应产生紫蓝色复合物，在分光光度仪下通过吸光峰值的变化（波长570nm），来定量测定体液钙的总浓度。其反应系统为：

产品内容

 缓冲液（Reagent A） 毫升

 反应液（Reagent B） 毫升

 标准液（Reagent C） 微升

产品说明书 1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，避免光照；有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于标准样品配制和样品保存的容器

微型台式离心机：用于样品制备

比色皿：用于反应的容器

分光光度仪：用于比色分析

实验步骤

• 样品准备

选择一：血浆样品

• 准备好肝素或ACD抗凝管（注意：避免使用EDTA抗凝管）
• 抽取1毫升血液，置于抗凝管里
• 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血浆成分（注意：避免触碰白色液体层）
• 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存

选择二：血清样品

1． 准备好不含抗凝剂的储存管 

• 抽取1毫升血液，置于储存管里
• 室温下，静置30分钟，直至血液凝结
• 放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为2000g（或5000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血清成分（注意：避免触碰白色液体层）
• 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存

选择三：尿液/脑脊液/唾液/精液样品 

• 准备好1.5毫升离心管
• 移取1毫升液体到离心管 
• 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上清液到新的1.5毫升离心管
• 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存

• 测定准备

• 准备好上述制备的待测样品，置于冰槽里备用
• 设定好分光光度仪：波长570nm，并置零 
• 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
• 分别加入xx微升 缓冲液（Reagent A）到2至5号管
• 移取xx微升 标准液（Reagent C）到1号管，混匀
• 小心移取xx微升1号管的 标准液（Reagent C）到2号管，混匀
• 小心移取xx微升2号管稀释的 标准液（Reagent C）到3号管，混匀
• 小心移取xx微升3号管稀释的 标准液（Reagent C）到4号管，混匀
• 将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

三、比色测定

• 移取xx微升 缓冲液（Reagent A）到新的1毫升比色皿
• 加入xx微升 反应液（Reagent B）
• （选择步骤）放进分光光度仪，置零
• （选择步骤）取出比色皿
• 加入100微升上述配制的标准液或待测样品 
• 上下倾倒数次，混匀
• 室温下孵育5分钟，避免光照
• 即刻放进分光光度仪检测：获得吸光读数（OD）
• 构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光单位（OD）；横座标（X轴）为标准钙浓度（毫摩尔/升）
• 根据标准曲线获得样品对应钙浓度 
• 计算样品实际钙浓度

注意事项

• 本产品为25次操作，包括标准液
• 操作时，须戴手套
• 避免使用EDTA等处理样品
• 建议样品保存在－70℃冰箱里
• 系统操作过程中，标准液测定只需1次
• 孵育反应完成后即刻进行比色测定
• 如果样本钙离子过低，可以增加孵育时间至30分钟
• 比色测定后，比色皿须清洗*
• 如果用户没有匹配的滤波器，可以使用570nm至600nm之间的任一波长
• 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
• 检测敏感度在5微摩尔至4毫摩尔钙浓度范围
• 本公司提供系列钙生化检测试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定检测敏感