国产液相色谱柱的色谱填料选择解析

　　国产液相色谱柱的构造由柱管、填料压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。柱管多用不锈钢制成，压力不高于70 kg/cm2时，也可采用厚壁玻璃或石英管。为提高柱效，减小管壁效应，管内壁要求有很高的光洁度，不锈钢柱内壁多经过抛光。色谱柱两端的柱接头内装有筛板，是烧结不锈钢或钛合金，孔径0.2-20µm(5-10µm),取决于填料粒度，目的是防止填料漏出。

　　现代液相色谱中，分离效果好坏的一个重要指标是色谱填料的选择。但是色谱填料的选择范围很宽，因此，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解：

　　1.硅胶基质填料

　　①正相色谱

　　正相色谱用的固定相通常为硅胶以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。

　　由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份z先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷，CHCl3，二氯甲烷等。

　　②反向色谱

　　反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分z先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。

　　常用的反向填料有：C18、C8、C4、C6H5等。

　　2.聚合物填料

　　聚合物填料多为聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等，其重要优点是在PH值为1-14均可使用。相对于硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的疏水性；大孔的聚合物对蛋白质等样品的分离非常有效。现有的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。

　　3.其它无机填料

　　其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化由于其特殊的性质，一般于特殊的用途。如石墨化碳黑正逐渐成为反向色谱柱填料。这种填料的分离不同于硅胶基质烷基键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性。该柱填料一般比烷基键合相硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强。石墨化碳可用于分离某些几何异构体，由于在HPLC流动相中不会被溶解，这类柱可在任何PH与温度下使用。氧化铝也可以用于HPLC。氧化铝微粒刚性强，可制成稳定的色谱柱柱床，其优点是可以在PH高达12的流动相中使用。但由于氧化铝与碱性化合物的作用也很强，应用范围受到一定限制，所以未能广泛应用。新型色谱氧化锆基质填料也可用于HPLC。商品化的只有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱，应用PH1-14，温度可达100℃。由于氧化锆填料是近几年才开始研究，加之面临的实验难度，其重要用途与优势尚在进行之中。