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ELISA试验主要操作步骤的技术要求和注意事项
一．试剂的准备
1.放冰箱内保存的试剂、在使用前应先恢复到室温，一般在室温平衡30分钟
2.仔细检查试剂各组分是否变质
3.浓缩的洗涤液需用新鲜的蒸馏水或去离子水按要求稀释，使用不合格的蒸馏水可能使空白值增高增高
4.保存试剂的冰箱应定期检查其贮存温度（正常为2-8℃），并尽量避免冰箱频繁开关
1.放冰箱内保存的试剂、在使用前应先恢复到室温，一般在室温平衡30分钟
2.仔细检查试剂各组分是否变质
3.浓缩的洗涤液需用新鲜的蒸馏水或去离子水按要求稀释，使用不合格的蒸馏水可能使空白值增高增高
4.保存试剂的冰箱应定期检查其贮存温度（正常为2-8℃），并尽量避免冰箱频繁开关
二．标本的采取与保存
1.尽量避免溶血
2.血清标本的制备：非抗凝自然凝固1-2小时，3000rpm离心15分钟
3.血浆标本的制备：使用含有抗凝剂的采血管采血，颠倒混匀放置一段时间后，3000rpm离心15分钟
4 .标本宜在新鲜时检测。若5天内检测，可使用冰箱2-8℃保存，超过一周时间测定，应于-20℃低温冻存
5.反复冻溶会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存做多次检测，宜少量分装冻存
1.尽量避免溶血
2.血清标本的制备：非抗凝自然凝固1-2小时，3000rpm离心15分钟
3.血浆标本的制备：使用含有抗凝剂的采血管采血，颠倒混匀放置一段时间后，3000rpm离心15分钟
4 .标本宜在新鲜时检测。若5天内检测，可使用冰箱2-8℃保存，超过一周时间测定，应于-20℃低温冻存
5.反复冻溶会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存做多次检测，宜少量分装冻存
三．加样
1． 严格按照说明书要求，按规定的量和顺序进行
2． 使用的微量加样器应注意保养并定期校正
3． 加样前应使溶液充分混匀，并将液体加在孔底，避免加在孔壁上部，注意不可出现气泡
4． 加样时避免样本溅出，如有样本溅出孔外时，应用吸水纸轻轻拭干，并做相应记录
5． 加样后微孔板应及时温育，尽量缩短加样后温育前的等待时间
1． 严格按照说明书要求，按规定的量和顺序进行
2． 使用的微量加样器应注意保养并定期校正
3． 加样前应使溶液充分混匀，并将液体加在孔底，避免加在孔壁上部，注意不可出现气泡
4． 加样时避免样本溅出，如有样本溅出孔外时，应用吸水纸轻轻拭干，并做相应记录
5． 加样后微孔板应及时温育，尽量缩短加样后温育前的等待时间
四．温育
1． 严格按照说明书要求，按规定的温度和温育时间进行
2． 保温容器是恒温水浴箱，可使温度很快达到平衡
3． 微孔板不可重叠放置，以免传热不均匀
4． 为避免孔内液体蒸发，可用封板胶将ELISA板面密封后进行温育
5． 温育时尽量少开启恒温箱门，不能人为缩短或延长温育时间
1． 严格按照说明书要求，按规定的温度和温育时间进行
2． 保温容器是恒温水浴箱，可使温度很快达到平衡
3． 微孔板不可重叠放置，以免传热不均匀
4． 为避免孔内液体蒸发，可用封板胶将ELISA板面密封后进行温育
5． 温育时尽量少开启恒温箱门，不能人为缩短或延长温育时间
五．洗板
1． 微孔板每遍洗板次数一般为3次，每次设计浸泡时间一般为30-60秒
2． 洗板时需保证微孔板平放，将洗涤液注满各孔，但尽量避免漏液溢液现象
3． 每次洗板的液体残留量不宜过多，洗完后，应将微孔板在吸水纸上轻轻拍干
4． 配置洗涤液需要新鲜无污染的蒸馏水或去离子现配现用
5． 盛放洗涤液的容器应定期使用清洁剂清洗，避免长菌或其它污染
1． 微孔板每遍洗板次数一般为3次，每次设计浸泡时间一般为30-60秒
2． 洗板时需保证微孔板平放，将洗涤液注满各孔，但尽量避免漏液溢液现象
3． 每次洗板的液体残留量不宜过多，洗完后，应将微孔板在吸水纸上轻轻拍干
4． 配置洗涤液需要新鲜无污染的蒸馏水或去离子现配现用
5． 盛放洗涤液的容器应定期使用清洁剂清洗，避免长菌或其它污染
六．显色
1． 坚持不使用过期显色剂，肉眼可见浅兰色的TMB显色剂不能使用
2． 显色剂避免接触金属器械，避免在空气中暴露时间过长
3． 加显色剂尽量避免溅出孔外
1． 坚持不使用过期显色剂，肉眼可见浅兰色的TMB显色剂不能使用
2． 显色剂避免接触金属器械，避免在空气中暴露时间过长
3． 加显色剂尽量避免溅出孔外
七．终止显色完后应及时终止，加终止液时避免出现气泡
八．结果判断
1． 按说明书的规定进行读数和结果判断
2． 酶标仪读数时应保证微孔板底部清洁，定期清洗酶标仪滤光片
3． 建议尽量使用双波长酶标仪读值，单波长读值应扣除空白对照值
1． 按说明书的规定进行读数和结果判断
2． 酶标仪读数时应保证微孔板底部清洁，定期清洗酶标仪滤光片
3． 建议尽量使用双波长酶标仪读值，单波长读值应扣除空白对照值
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