<培养细胞>

　　培养细胞总是会让科研小白茶饭不思，担惊受怕，即使大好春光出去陪美眉或者小哥哥，也会牵肠挂肚，心不在焉。

　　万一污染了又要看到师兄师姐鄙视的目光，嫌弃的嘴角，还有因为污染造成其他战友的惊恐不安，想想都怕怕。

　　师姐A：师妹！！！让你养着玩的细胞又污染了。

　　师姐B：纳尼？！

　　师姐C（火速赶往案发现场）：我的心肝宝贝细胞你还好么？

　　师兄A:天啊！！！并致电女票：“亲爱的，晚上不能陪你了，新来的师妹细胞又污染了，我又要给培养箱灭菌了”。

　　师妹：我是罪人，好丢脸。像我这样的小白如何避免细胞污染呢？

　　“师妹过来，师兄手把手教你，如何预防细胞污染。” 想当年师兄就是靠养细胞培养起来的重度洁癖。

　　常规操作不再赘述，主要安利以下内容：

　　1. 仔细阅读所在实验室的细胞室综合管理制度，严格遵守制度。

　　2. 细胞室室内灭菌可以交叉进行，熏蒸、臭氧、紫外、新洁尔灭。

　　3. 根据细胞室空间，限制同时进入人数。

　　4. 超净工作台使用前后，紫外灯照射灭菌。使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒（小窍门：超净台使用完毕后，可以用酒精喷洒桌面，再用抽纸擦干净，比用酒精棉球干净多喽！使用前不建议这种方法擦拭）。物品放入超净台前均应酒精喷洒消毒，超净台内严禁堆放过多物品，以免影响风路平衡。

　　5. 水浴锅使用完毕后及时将水倒掉，并保持锅内干燥。常用水浴锅时，每周将水浴锅中的水至少煮沸一次，以防细菌滋生。

　　6. 从培养箱取放细胞前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。培养瓶放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。

　　7. 培养箱用水每周更换一次，更换前托盘用酒精擦拭、紫外灯照射30分钟杀菌。

　　8. 灭完菌枪头，烘箱烘干后存放，保质期1周。逾期需重新灭菌使用。

　　9. 培养液、胰酶、PBS等试剂尽量不和别人共用，应单独分装使用，以免交叉污染，也便污染后自查原因。

　　10.在使用0.22μm的微孔滤膜过滤自配溶液时，注意无菌操作规范，以防滤液污染。特殊情况可检菌安全后使用。

　　11.除特殊要求外，建议培养基中添加双抗，算是送给细胞的守护神。

　　12.防护服、口罩、手套缺一不可。隔壁细胞室负责人是韩国回来的博士，让学生只戴手套操作，于是经常听他们说细胞挂了。

　　13.操作前，准备好所有实验所需物品，以减少走动；物品需有序摆放在超净台触手可及的地方，同时空留足够操作空间。

　　14.操作时，试剂不用尽量及时盖上盖子，移至操作区外围，尽量不要从开口容器上经过。

　　15.使用移液枪时，将容器倾斜以便于移液，切勿将枪杆碰触瓶口及内壁。一旦发生倒吸情况，要及时用酒精棉球擦拭，以免液体残留导致细菌滋生。

　　16.先取试剂、耗材，再取移液枪、安枪头。很多人习惯先安枪头，然后去拿试剂、耗材，殊不知无意间枪头已经触碰其他地方导致污染。

　　17.向废液缸打废液时，需轻柔，以免造成水花四溅，污染枪头、枪体。实验结束，及时倒掉废液缸垃圾，冲洗之后喷洒酒精，放入超净台紫外照射杀菌。

　　18.培养基滴在桌面时要及时用酒精棉球擦拭，切记不要等实验做完再处理。因为那样，你的台面上就会留下一个印记，对于强迫症的人来说，不！能！接！受！！！！

　　19.冻存细胞时冻存管盖子需拧紧。复苏细胞时，从液氮罐取出冻存管，轻拧盖子，以确认盖子是否拧紧。镊子夹住冻存管盖子与管体交界处，在37度水浴锅中快速解冻，水面不可超过冻存管盖沿；不建议直接扔进水中，以免水渗入造成污染。

　　20.一旦污染，及时处理，不到不得已不建议施救；查找原因，防止再犯。

　　总的来说，防患未然比亡羊补牢强得多。操作过程中对于模糊不清的，宁愿认为是有菌的弃掉，也不要心存侥幸！