甲基化特异性PCR
标签: 甲基化 特异性 PCR
DNA甲基化是一种表观遗传修饰,它是由DNA甲基转移酶(DNA methyl-transferase, Dnmt)催化S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体,将胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶(mC)的一种反应,在真核生物DNA中,5-甲基胞嘧啶是唯yi存在的化学性修饰碱基。
- 亚硫酸氢钠法
实验方法原理 | MSP是一种简便、特异的、敏感的检测单基因甲基化的方式。其基本原理是用亚硫酸氢钠处理基因 组DNA,未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变,然后用3对特异性的引物对所测基因的同一核苷酸序列进行扩增。扩增产物用DNA琼脂糖凝胶电泳,凝胶扫描观察分析结果。 |
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实验材料 | DNA |
试剂、试剂盒 | 亚硫酸氢钠、氢醌、石蜡油、乙醇 |
仪器、耗材 | 水浴锅、PCR仪 |
实验步骤 | 1. 在50 μl 体系中,DNA(2~5 μg)经NaOH(终浓度值0.2 mol/L)在37℃变性10 Min。
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