流式细胞仪(flow cytometer)是一种能够探测和计数以单细胞液体流形式穿过激光束的细胞检测装置,由于在检测中使用的细胞标志示踪物质为荧光标记物,因此,用来分离、鉴定细胞的流式细胞仪有被称为荧光激活细胞分类仪,是分离和鉴定细胞群及亚群的一种强而有力的应用工具。
- 流式细胞仪
实验方法原理 | 流式细胞仪的使用一般分为三个步骤。,是仪器前阶段,包括试剂的准备,细胞制备、细胞的荧光染色;第二,是流式细胞仪阶段,主要是仪器的操作;第三,是结果分析阶段。 |
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实验材料 | 淋巴细胞外周血的白细胞 |
试剂、试剂盒 | FACS缓冲液PBS叠氮钠溶液仪器缓冲液FACS清洁液FACS洗净液 |
仪器、耗材 | 流式细胞仪 |
实验步骤 | 一、 细胞和试剂的准备
4. FACS缓冲液: 1×PBS 950 ml FCS 40 ml 10%叠氮钠溶液 10 ml
1. 单细胞悬液的制备:将1×105~1×107的细胞放入1.5 m l离心管中3000 r/min 离心5分钟,弃上清;加入FACS缓冲液100 μl 悬浮细胞。
b.abti-CD3(2 ng/ml)检测结果
c.abti-CD3(10 ng/ml)检测结果
CD4及CD8细胞点状二维图结果
不同的荧光物要求选择不同的激发波长,参见下表
(2)细胞的吸入:将装有细胞的FACS测定管放置到机器吸管孔处。 先预检测样品,然后进行实际检测。可根据细胞的浓度选择测定的速度(低、中或高)。所有的数据将自动存入微机。
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注意事项 | 1. 减少非特异荧光染色 (1)细胞的活性和状态:流式细胞仪不但可探测细胞表面的荧光,也可探测细胞内的荧光。因此,如果要检测细胞表面的分子,一定要保证细胞的活性,还应尽可能保持细胞静止,通常在4度进行操作。否则,荧光抗体进入死细胞内,会产生非特异结果。
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