：荧光显微镜汞灯调节

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技术：李

    荧光显微镜的一个重要特点是它能够探测到荧光的对象，有时隐隐可见，甚非常明亮与黑暗的背景（通常是黑色）。为了优化此功能，使用的引物在该部分将要讨论的原则，图像的亮度和分辨率必须大化。 

   图像亮度 - 优化的图像的亮度的重要的方面之一是，以确保在每个连接到试样的发色基团的适当的波长，样品被提供用于激励具有足够的光能量。同样重要的是，选择适当的挡板滤光镜，向观察管或摄像管发射的荧光的量大化。我们已经组建了一个表列出的荧光激发和发射数据，这将有助于实现这一物镜。高能量的光源，如汞和氙气的燃烧器，将提供大量的激发能在非常窄的范围的近紫外和可见光。当使用这些光源耦合到同时阻挡那些是不希望的，能够发送所选波长的激发滤光镜，适当地选择，然后将满足用于激发的佳标准。 


    挡板滤光镜，防止不需要的波长进入观察管的选择是一个主要问题。激发的总能量是远远大于发射的能量，因此，重要的是要选择一个有效的挡板滤光镜，将阻止不必要的波长荧光发射，同时允许从样品通过。为荧光选择的物镜必须能够有效地透射光，在近紫外区域和在整个可见光谱。 

在低发射的光水平的图，在荧光显微镜中的作用的物镜是非常重要的，因为它是收集来自样本的光的物镜的功能。物镜所接受的光的锥角是由数值孔径（NA）为物镜来确定，如在图1中示出。在透射光中的荧光显微镜，到达眼睛或其它检测器的光的强度成正比作为物镜和聚光镜的总放大倍数的平方成反比的数值孔径的平方。 

    这种差异来作为物镜的初功能作为一个聚光镜，用于在样本上的光聚光，然后作为用于图像形成的通常的光采集的结果。其意义是显而易见的：高数值孔径物镜会产生高得多的强度比相同的放大倍数较低的数值孔径的物镜图像。例如，其他的事情都是平等的，40倍物镜的NA为1.0将带来超过5倍的亮度比40倍物镜的数值孔径为0.65的图像。进一步的含义是，如果可能的话，低倍率的视觉目镜（如8倍的放大倍率）也将增加图像的亮度相比，比较常用的10X观察目镜。此外，在反射光中的荧光，激发光被浓缩的物镜（在其作为聚光镜的功能），仅在被观察的区域。其结果的激励光的强度远高于在透射光中的暗视野荧光，其中被激发的面积不改变作为物镜被改变。此外，在暗视野，物镜的数值孔径必须被减小到低于保存的视场的黑暗的聚光镜。 


    除了是一个重要的考虑因素的数值孔径，这是可取的有高质量的色差校正的物镜，因为聚焦在同一平面上的各种颜色，将产生更清晰的图像。另外，更好的球面校正，更清晰的图像。因此中，物镜的选择是平场复消色差物镜或平场荧光物镜。的设计应使这些透镜元件及其水泥本身不会自动荧光时，低于400纳米的波长（光在近紫外）光照射。 


在可能的情况下，应采用油浸物镜，从载玻片和盖玻片表面反射所造成的光损失减少到小。现代显微镜商努力为客户提供光学元件是*免费的自体荧光污染物，但是这方面也应考虑自体荧光将减少通过增加背景亮度对比样品。 
  

灯箱结构

灯箱（Lamphouse Frame）：固定荧光灯箱内部结构的机械支架，具有良好的散热功能；

灯泡（Mercury Arc Lamp）：高压短弧汞灯，产生连续波谱的灯管，为试验提供照明；

反光镜（Mirror）：类似一个碗口向着汞灯的镜面结构，因为汞灯灯泡发出的光是四散方向的，为了保证荧光显微镜更好的照明效率，增加了这个收集光线的装置，来收集汞灯发出的与照明方向相反的光。

集光镜（Collector Lens）：是将汞灯和反光镜获得的光线进行汇集，形成率的一束平行光，提供给荧光照明系统。

如何调节汞灯

1）保证光源已经启动；

2）将调节附件或一张平坦的白纸放到样品夹上对焦；

3）调节“Collector Focus Knob”将本像和镜像调节清晰（如下图），此时会发现有两个像，但它们的位置是一上一下或一左一右；

4）调节汞灯位置调节钮，将两个像调节（左图），将其两像重合（右图）；

5）此时中心已经调节完毕，可以拿样品进行观察，如果视野下亮度不均匀，可微调节调焦旋钮。

希望对广大客户有所帮助！