纯化线粒体磷氧比（ADP/O）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

纯化线粒体磷氧比（ADP/O）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

 纯化线粒体磷氧比（ADP/O）定量检测试剂是一种旨在通过极谱法检测系统（polarographic system）测定新鲜活体线粒体在已知浓度ADP存在（III态呼吸）的情况下氧浓度的降低，来分析磷氧比（P：O ratio），以评价线粒体呼吸链和氧化磷酸化偶联程度，即能量转化效率的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。可以被用于线粒体生理功能和药物作用机制等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。

技术背景

线粒体是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心。电子传递和ATP合成通过质子梯度偶联成一体，即线粒体的呼吸耗氧偶联着ADP与Pi合成ATP的磷酸化反应。线粒体每吸收一克原子氧的同时，生长ATP（ADP磷酸化）的克分子数的比值，为ADP/O值。线粒体的磷氧比直接表征线粒体呼吸耗氧和ATP合成的关系。正常线粒体的ADP/O（P/O）为1.5：磷氧比降低意味着线粒体解偶联；磷氧比增高意味着线粒体偶联良好。其zui大值为3.3。

产品内容

 介质液（Reagent A）      50毫升

 底物液（Reagent B）          800微升

产品说明书  1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，有效保证6月

用户自备

CLARK氧电极仪：用于测定溶解氧浓度

实验步骤

实验开始前，制备好新鲜的线粒体置于冰槽里备用；同时将－20℃冰箱里的试剂融化，并预热氧电极仪到25℃。然后进行下列操作。

• 加入2.5毫升 介质液（Reagent A）到反应玻璃槽
• 使用微型磁力子搅拌，充分混匀
• 密封反应槽
• 开始记录氧浓度：起始饱和氧浓度值为0.240微摩尔分子氧/毫升（25℃）
• 持续记录1分钟后，注射加入20微升待测的线粒体（总量2毫克）（注意：氧浓度可能瞬时变化）
• 持续记录1分钟后，注射加入20微升  底物液（Reagent B）（注意：氧浓度在10秒钟内开始下滑；参见注意事项9）
• 持续记录直至出现线性下行斜线出现拐点
• 继续注射加入20微升  底物液（Reagent B）（注意：氧浓度在10秒钟内开始下滑） 
• 持续记录直至出现线性下行斜线出现拐点
• 测算氧浓度降低值（微摩尔/毫升）：

【（*次加入底物前的氧浓度－*次下行斜线拐点时的氧浓度） ＋（第二次加入底物前的氧浓度－第二次下行斜线拐点时的氧浓度）】÷2（实验次数）

• 计算ADP/O： 

0.2微摩尔（ADP浓度）÷【氧浓度降低值（微摩尔/毫升）X 2.5（反应体系容量；毫升）X 2 （氧分子数）】

注意事项

• 本产品为20次操作
• 操作时，须戴手套
• 确保反应玻璃槽洁净，密闭，以免氧气流入
• 线粒体样品须新鲜制备，建议不要冻存；制备的线粒体膜须完整，非常重要；建议使用 线粒体分离试剂盒－GMS10006.1
• 注射加入反应槽时，避免气泡和空气注入
• 避免乙醇污染；乙醇增加氧浓度；如果底物或抑制剂须使用乙醇溶解，则加注10微升
• 保持反应槽温度恒定，温度降低，氧浓度升高
• 反应液充分混匀，和环境氧保持平衡
• 加注  底物液（Reagent B）前，须充分冻融和混匀
• 严格按照规定加注试剂，切莫增加加注试剂容量
• 氧浓度百分值转换为微摩尔/毫升：

公式=【测定值（百分值）÷20.9%（环境标准氧百分值）】X 0.237（系数；微摩尔/毫升）

• 本公司提供系列线粒体检测试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定检测敏感