血清钙离子浓度比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

 血清钙离子浓度比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

 血清钙离子浓度比色法定量检测试剂是一种旨在通过甲基百里酚蓝，在碱性条件下与钙离子反应产生蓝色复合物，在分光光度仪下通过吸光峰值的变化，即采用比色法来测定样品中总钙离子浓度的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种血清或者其它体液样品中总钙离子的浓度检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。

技术背景

钙是人体中的一种重要电介质和矿物质，占1150克。其中99％的钙以氟磷灰石钙（calcium fluorophosphate apatite）形式存在于骨组织中。非骨组织钙成分主要存在于细胞内。钙具有两种主要形式：一种是非弥散型蛋白结合钙，其构成约40％至50％的血清中的总钙含量；另一种为弥散型游离钙，其进一步分成具有活性的复合钙（complexed calcium）和离子钙（ionized calcium）。钙对神经肌肉兴奋性（neuromuscular excitability）、血液凝固、酶的激活、离子跨膜运输、释放神经传导介质、信使传导等方面起着重要作用。钙的检测包括沉淀法、EDTA鳌合滴定法、火焰光度法（flame photometry）、原子吸收分光光度法等技术，但容易受到钠、钾、磷酸盐、硫酸盐的干扰，或者受限于仪器的特殊的要求。甲基百里酚蓝（methylthymol blue；MTB）比色法是一种稳定、简便、准确、直接的钙检测技术。钙与甲基百里酚蓝，在碱性条件下反应产生蓝色复合物，在分光光度仪下通过吸光峰值的变化（波长612nm），来定量测定钙的总浓度。其反应系统为：

OH^-

  Ca^＋＋  +  methylthymol blue   →    Ca-MTB Complex 

产品内容

 缓冲液（Reagent A） 25毫升

 反应液（Reagent B）      25毫升

 阴性液（Reagent C）     1.5毫升

 标准液（Reagent D）     500微升

产品说明书     1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，避免光照，有效保证3月

用户自备

1.5毫升离心管：用于标准样品和待测样品操作的容器

5毫升玻璃管：用于尿液样品制备的容器

微型台式离心机：用于样品制备

培养箱：用于反应孵育

比色皿：用于反应的容器

分光光度仪：用于比色分析

实验步骤

• 样品准备

选择一：血清样品

• 准备好不含抗凝剂的储存管 
• 抽取1毫升血液，置于储存管里
• 室温下，静置30分钟，直至血液凝结（注意：血液凝集后，不宜久置）
• 放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为2000g（或5000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血清成分（注意：避免触碰白色液体层）
• 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存

选择二：尿液样品 

• 准备好5毫升玻璃管
• 移取1毫升液体到玻璃管 
• 调节pH到3至4（注意：使用0.1摩尔盐酸调节）
• 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上清液到新的5毫升玻璃管 
• 加入2倍容量的用户自备的无离子水
• 即刻置于冰槽里备用 

• 测定准备

• 准备好上述制备的待测样品，置于冰槽里备用
• 设定好分光光度仪：波长612nm，并置零 
• 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
• 分别加入100微升 缓冲液（Reagent A）到2至5号管
• 移取200微升 标准液（Reagent D）到1号管，混匀
• 小心移取100微升1号管的 标准液（Reagent D）到2号管，混匀
• 小心移取100微升2号管稀释的 标准液（Reagent D）到3号管，混匀
• 小心移取100微升3号管稀释的 标准液（Reagent D）到4号管，混匀
• 将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

三、（选择步骤）背景对照测定

• 移取500微升 缓冲液（Reagent A）到新的1毫升比色皿
• 加入500微升 反应液（Reagent B）
• 加入20微升 阴性液（Reagent C）  
• 上下倾倒数次，混匀
• 放进37℃培养箱里孵育5分钟，避免光照
• 即刻放进分光光度仪（612nm波长）检测：获得吸光读数（OD）

• 标准样品和待测样品测定

• 移取500微升 缓冲液（Reagent A）到新的1毫升比色皿
• 加入500微升 反应液（Reagent B）
• 加入20微升上述配制的标准液或待测样品 
• 上下倾倒数次，混匀
• 放进37℃培养箱里孵育5分钟，避免光照
• 即刻放进分光光度仪（612nm波长）检测：获得吸光读数（OD）
• 实际吸光读数：标准样品和待测样品吸光读数－背景对照吸光读数
• 构建标准曲线：纵座标（Y轴）为实际吸光读数（OD）；横座标（X轴）为标准钙浓度（毫摩尔/升）
• 根据标准曲线获得样品对应钙浓度
• 计算样品实际钙浓度（注意：计算时，不要遗忘稀释倍数；例如尿液样品需要乘上3）

【根据标准曲线获得样品对应钙浓度（毫摩尔/升）X 样品稀释倍数】＝毫摩尔/升

注意事项

• 本产品为50次操作，包括标准液
• 操作时，须戴手套
• 检测过程中，尤其在标准曲线测定过程中，先将所需的 缓冲液（Reagent A）和 反应液（Reagent B）全部混合后，再移取1毫升工作液进行测定操作，避免操作误差
• 避免使用EDTA、溴磺酚酞（bromosulfophthalein）、胆红素（Bilirubin）、对乙酰氨基（acetaminophen）、肼屈嗪（Hydralazine）等，否则干扰检测
• 建议使用空腹后采集的无溶血现象的血清样品
• 陈旧血清，尤其出现沉淀的血清，不宜使用
• 血清钙在室温下，24小时内成分稳定；4℃条件下，可维持1周；－20℃条件下，可维持5月
• 系统操作过程中，标准液测定只需1次
• 孵育反应完成后即刻进行比色测定
• 比色测定后，比色皿须清洗*
• 如果用户没有匹配的滤波器，可以使用600nm至650nm之间的任一波长
• 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
• 检测敏感度在5微摩尔至4毫摩尔钙浓度范围
• 正常血钙和尿钙浓度：小于4周新生儿：7.2至11.2毫克/分升；2月至12月婴儿：8.4至10.8毫克/分升；大于1岁：8.4至10.4毫克/分升；成人：8.6至10.2毫克/分升；尿钙24小时总量100至320毫克
• 换算：1毫摩尔/升 X  4.01 ＝ 毫克/分升；1毫克/分升＝250微摩尔/升
• 本公司提供系列钙生化检测试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定检测敏感