在做牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒实验的过程中,加样时难免会出现气泡。通常气泡都是聚集在酶标板的孔周围,导致孔中液体不能与孔壁有效接触,使孔内反应不均一。在做实验的过程中,有时为了打干净枪头里面的液体,很容易产生气泡,那么气泡对ELISA实验结果会有什么影响呢?
1.通常气泡都是聚集在酶标板的孔周围,导致孔中液体不能与孔壁有效接触,使孔内反应不均一。
2.包被时有气泡的话,将导致包被不*实际包被量下降--弱阳性甚至假阴性。
3.封闭时有气泡的话,将导致大量未结合位点的存在,引起非特异性结合--本底增高,假阳性。
4.加样时有气泡的话,抗原抗体不能有效的结合--弱阳性甚至假阴性。
5.加二抗时有气泡的话,抗原抗体不能有效的结合--弱阳性甚至假阴性(竞争法相反----假阳性)。
6.加显色液时有气泡的话---显色不*。
7.加终止液时有气泡的话(1、不能*终止反应 2、影响酶标仪比色,OD值增高)
8.洗涤时有气泡的话,非特异性结合物不能*洗去,做无用功。
避免方法:
1、加样时尽量靠近孔底(不要接触孔底),用力均匀,不要过快过猛。
2、牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒封闭时一定要加满孔。
3、洗涤时一定要加满孔(重要),气泡会浮上来zui终驱除。手工洗板时一定要吸干水分并用力拍干。
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牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒
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