原代培养经验分享

来源：上海北诺生物科技有限公司 2017年08月02日 10:56

经验分享：

1.原代细胞铺満瓶底后弃原液，PBS冲洗2次。

2.加入0.25%Trypsin-0.02%EDTA,量覆盖瓶底即可，室温作用，镜下观察至组织块周围的细胞回缩，立体感增强。

3.弃去消化液，PBS轻漂一遍(目的是除去EDTA，它对脆弱的原代细胞很不好)但不要用力摇晃，以免部分消化稍过的细胞流失。

4.加入培养液吹打，不要产生气泡，对细胞有损。

5.吸出2/3的悬液传入新瓶。
6.向原瓶中余下的1/3细胞悬液中补加2/3的新培养液，与未消化的组织块继续培养。

7. 24小时内新的细胞又从组织块中爬出啦，等铺满后再如上所述做一次吧。

注：

1.只有当原代培养时组织块较多时才这样做，否则得不偿失。

2.保留1/3的细胞是为了让余下的组织块在细胞间作用下迅速健康的生长。

3.一瓶细胞以此法处理不要超过3次。

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