水产品中孔雀石绿检测的固相萃取方法

（SuperClean AL-A）

一、实验目的

本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC 法作为分析方法，检测水产品中孔雀石绿含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物

孔雀石绿(CAS:569-64-2)

三、应用范围

本方法适用于水产品中孔雀石绿的检测的 HPLC 检测及确证。四、参考标准

《GB/T 19857-2005 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》五、实验材料

NuAnalytical SuperClean Alumina-A 固相萃取柱 1000 mg/3mL。六、实验方法

1、 样品待测溶液制备

准确称取鱼肉样品 5.0 g 于 50 mL 离心管 1 中，加入 1.5 mL 20%的盐酸羟胺，2.5 mL 1.0

mol/L 的对甲苯磺酸溶液，5.0 mL 乙酸钠-对甲苯磺酸缓冲液（4.95 g 无水乙酸钠及 0.95 g  对

-甲苯磺酸于950ml水中，用乙酸调pH 至 4.5，用水定容至1 L），匀浆机均质30 （s  10000 r/min）。

加入 10 mL 乙腈，剧烈振摇 30 s。加入 5 g 酸性氧化铝，震荡 30 s。离心机离心 10 min（3000

r/min）,取上清液转移至预先加好 10 mL 水、2 mL 二甘醇的离心管 2 中。加入 10 mL 乙腈至离心管 1 中，重复上述提取一次，合并乙腈层。

离心管 2 中加入 15 mL 二氯甲烷，振荡 10 s，离心 10 min（3000 r/min），取二氯甲烷层于梨形瓶中。继续用 5 mL 乙腈、10 mL 二氯甲烷重复上述提取一次，合并两次提取的二氯甲烷层。将提取液 45  ℃旋转蒸发至 1 mL，再用 2.5 mL 乙腈溶解，待净化。

2、活化

依次用 5  mL 乙腈活化

3、上样和洗脱

将梨形瓶中的待净化液转移至柱中净化，梨形瓶使用 2.5 mL×2 的乙腈洗涤瓶两次，把洗涤液依次通过柱子，整个上样过程保持流速不超过 0.6 mL/min，收集全部流出液。

4、重新溶解

流出液 45  ℃氮吹至近干，用 1 mL 乙腈定容，过 0.45 μm 滤膜。

5、HPLC 条件

色谱柱：SuperLu C18 (250×4.6 mm,    5μm)

检测器：紫外检测器，λ=618 nm

流动相：A-乙腈    B-0.05 mol/L 乙酸铵缓冲溶液流速：1.2 mL/min           进样体积:50 μL

洗脱方式：梯度洗脱，梯度洗脱条件如下：

七、实验结果

1、0.1 mg/kg 鱼肉中孔雀石绿的添加回收结果

表 1    0.1mg/kg 鱼肉中孔雀石绿的添加回收结果

回收率（%）

2、添加水平为 0.1 mg/kg 鱼肉中孔雀石绿检测的液相色谱图

图 1    添加水平为 0.1 mg/kg 鱼肉中孔雀石绿检测的液相色谱图