DNA聚合酶要进行DNA聚合反应时一定要有引子 (primer),因为它只能以引子所提供的3’-OH为起始点进行延伸 (extension) 的工作,而不能就地重新合成新的DNA (de novo synthesis)。 一般实验常以人工合成的寡核苷酸为引子进行DNA聚合反应,这时固然可以根据已知序列设计核酸引子,但也可以采用逢机引子(random primers)。 所谓逢机引子即其序列为逢机序列,不经特别设计,目前应用zui广者是以自动化机器所合成的、六到八个核苷酸长的寡核苷酸混合物;反应进行中若有任何一条逢机引子结合到模版DNA,即可引导DNA聚合反应的进行。 以random priming方法进行核酸标定,是以逢机引子引导Klenow fragment(large fragment of E. coli DNA polymerase I) 进行DNA聚合反应,并在反应过程中添加 [α-32P]dNTP或DIG-11-dUTP等标定物质。 而为了避免random priming也发生于载体部份的DNA,不要直接以质体DNA为模版进行标定反应,而应预先将目标DNA自载体切除出來。
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