BCA法蛋白抽提定量实验 返回列表页

BCA法蛋白抽提定量实验步骤

BCA（Bicinchoninic acid）法是一种常用的蛋白质定量方法，它基于蛋白质在碱性条件下能够将铜离子（Cu^2+）还原为亚铜离子（Cu^+），随后BCA与Cu^+形成稳定的紫色复合物，该复合物在562nm处具有强烈的吸光度，其吸光度与蛋白质浓度呈正比。

以下是使用BCA法蛋白抽提定量实验的基本步骤：

1.配制标准品和工作液：

  配制不同浓度的牛血清白蛋白（BSA）标准品溶液，通常线性范围为20-2000 μg/mL。

  配制BCA工作液，将BCA试剂A和BCA试剂B按50:1的比例混合。

2.样品处理：

  如果需要，对蛋白质样品进行适当的抽提和稀释。

3.加入BCA工作液：

  向含有标准品和待测样品的微孔板或试管中加入BCA工作液，样品与工作液的体积比通常为1:20。

4.孵育：

  将微孔板或试管在37°C下孵育30分钟，以促进颜色的发展。

5.冷却和读取吸光度：

  孵育结束后，让样品冷却至室温。

  使用酶标仪在562nm波长处测定样品的吸光度。

6.制作标准曲线：

  根据BSA标准品的吸光度绘制标准曲线，并计算样品中蛋白质的浓度。

注意事项：

  确保所有试剂在使用前充分混合且在推荐的温度下存储。

  严格按照试剂添加顺序和操作步骤进行，避免任何步骤的颠倒或省略。

  实验中应包括空白对照，以消除试剂本身的吸光度贡献。

以上步骤综合了多个搜索结果中的信息。在进行实验时，应遵循最新的实验指南和制造商的具体指示，以确保实验结果的准确性。