单细胞凝胶电泳实验 返回列表页

单细胞凝胶电泳实验步骤

单细胞凝胶电泳（Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE），也称为彗星试验（Comet Assay），是一种用于检测单细胞DNA损伤的实验方法。

以下是基于最新信息的单细胞凝胶电泳实验步骤：

1.单细胞悬液的制备：

  1.1体外培养的细胞通常使用yi酶消化后，用磷酸盐缓冲盐水（PBS）调整细胞浓度至适宜的密度。

  1.2体内器官细胞需要从动物体内取出后，在适当的缓冲液中制备成单细胞悬液。

2.凝胶板的制备：

  2.1制备底层胶，通常使用0.5%的正常熔点琼脂糖（Normal Melt Agarose, NMA）。

  2.2在底层胶上加入含有细胞的0.5%低熔点琼脂糖（Low Melt Agarose, LMA），形成包含细胞的顶层胶。

3.细胞裂解与解旋：

  3.1将制备好的凝胶板浸入预冷的细胞裂解液中，裂解细胞以暴露DNA。

  3.2裂解后，将凝胶板在碱性电泳缓冲液中解旋，以便DNA能够在电场中迁移。

4.电泳：

      将凝胶板置于电泳槽中，进行碱性电泳，以分离损伤的DNA片段。

5.中和与染色：

      电泳结束后，使用中和液中和凝胶板，然后用溴化乙锭（Ethidium Bromide, EB）或其他适合的核酸染料染色。

6.显微观察：

      在荧光显微镜下观察和拍照，分析彗星尾巴的长度和亮度，以定量评估DNA损伤的程度。

注意事项

  1.确保使用新鲜的试剂和细胞样本，以获得可靠的实验结果。

  2.电泳过程中应保持低温，以减少DNA降解。

  3.裂解液的质量对实验结果至关重要，应确保裂解液澄清且wanquan溶解。

  4.在操作过程中应避免DNA损伤，特别是在制备单细胞悬液和凝胶板时。

  5.使用适当的防护措施处理有害化学品，如溴化乙锭。

以上步骤综合了最新的实验操作指南和技术建议，确保了实验的时效性和准确性.