小鼠脾脏单细胞分离 返回列表页

1 物理方法
又称机械法,分为3种:(1)研磨法，即通过简单研磨后过滤去除杂质。本法一般针对脆性较大的组织,虽简单易行,但对细胞损伤较大,且经过滤获得的细胞纯度不高;(2)振荡法,即通过振荡后过滤获得细胞悬液,一般针对细胞间联接不是非常紧密的组织;(3)直接分离法：本法所得细胞产量较高,形态完整,分散度好，杂质少,但活性与功能较差,且随着培养时间的延长,活性及功能逐渐下降,不适于一些持续时间较长的实验研究。
2 化学方法
又称鳌合法,即利用一些特殊的化学试剂破坏细胞间的联接。Ca2+、Mg2+等在细胞间桥粒联接中起重要作用，鳌合剂(EDTA、EGTA、柠檬酸盐等)结合了这些离子后，可使桥粒联接断开,有利于细胞分离。本法单独使用效果较差,常与酶消化法结合使用。
3 生物方法
使用普遍的是酶消化法,即利用特定的酶溶液溶解、破坏细胞间蛋白联接,是目前分离获取游离组织细胞常用的方法。根据不同细胞不同的蛋白联接应选用不同的酶种类。胶原蛋白在高等动物机体中含量丰富,是动物和人体皮肤、血管.骨胳等组织的主要基质,故常用的是胶原酶法。胶原蛋白有很多种类型,其对应的酶也各不相同。位于基底膜的第IV型胶原蛋白是维持细胞养分和其他正常代谢的重要关键,故破坏此蛋白一般即可达到分离的目的。