细胞划痕检测 返回列表页

一、实验原理
细胞划痕(wound healing)法是简捷测定细胞迁移运动和修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央部分的细胞，然后继续培养细胞至实验设定的时间，取出细胞培养板，观察周边细胞的生长迁移能力，实验通常需设定正常对照组和实验组，实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别，通过不同分组之间的细胞对于划痕区修复能力的不同，可以判断各组细胞的迁移与修复能力。
二、实验步骤
1、 所有要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min. .
2、先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，大约每隔0.5-1cm一道，横穿过孔，每孔至少穿过5           条线。

3、在空中加入约5X105个细胞(具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满)，37C培养箱培              养。

4、第二天用10μ1枪头比着直尺，与标记线垂直的方向划两条平行线，枪头要垂直，不能倾斜。
5、用PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入无血清培养基。
6、放入37°C 5% CO2培养箱，按0、6、12、24h倒置显微镜观察，拍照。