| 供货周期 |
一个月 |
应用领域 |
化工,生物产业,制药/生物制药 |
人可溶性转铁蛋白受体试剂盒，用于检测多样人样本中该受体含量，基于双抗夹心 ELISA 法。操作规范细致，从样本处理到读数多环节有注意要点，保障结果准确。
人可溶性转铁蛋白受体试剂盒介绍
人可溶性转铁蛋白受体试剂盒，在医学研究与临床诊断领域发挥着关键作用，主要用于精准检测人血清、血浆、组织匀浆以及细胞培养上清液等样本中的可溶性转铁蛋白受体（sTfR）含量。通过对 sTfR 含量的测定，能够为评估人体铁代谢状态、诊断缺铁性贫血等相关疾病提供重要依据 。
一、检测原理
该试剂盒多采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）原理 。在试剂盒的酶标板孔内，预先包被有针对人 sTfR 的特异性捕获抗体。当开展检测时，将标准品与待测样本依次加入酶标板孔中。样本中的 sTfR 会迅速与包被在孔壁上的捕获抗体特异性结合。温育一段时间，使结合反应充分进行后，通过洗涤操作去除未结合的杂质成分。随后，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，该抗体能够与已经结合在捕获抗体上的 sTfR 再次特异性结合，从而形成 “捕获抗体 - sTfR - 酶标检测抗体" 的稳固免疫复合物 。再次洗涤，以清除未参与反应的多余酶标检测抗体。紧接着，向各孔中添加底物 TMB。在 HRP 的催化作用下，原本无色的 TMB 底物发生化学反应，逐步转变为蓝色产物 。反应持续一段时间后，加入终止液，使反应迅速停止，此时溶液颜色由蓝色转变为黄色 。由于溶液颜色的深浅程度与样本中 sTfR 的含量呈正相关关系，借助酶标仪在 450nm 波长下测量各孔溶液的吸光度（OD 值），并依据标准品的 OD 值绘制出标准曲线，即可精准推算出待测样本中 sTfR 的浓度 。
二、操作步骤
样本准备：血清样本采集后，需在 1000×g 的条件下离心 10 分钟，小心分离出血清；血浆样本同样按此离心条件处理；细胞上清液则需以 1000×g 离心 10 分钟，去除其中的颗粒和聚合物；组织匀浆要先将组织与适量生理盐水混合捣碎，再经 1000×g 离心 10 分钟，取上清液备用 。若样本不立即使用，应分成小份，在 - 70℃环境下保存，防止反复冻融，使用前需在室温下充分解冻并确保均匀 。
试剂准备：从冰箱取出试剂盒后，需将所有试剂在室温下平衡至稳定状态，并充分混匀 。同时，依据实验所需检测的样本数量，确定酶标板的使用条数，标准品孔和空白孔建议设置复孔，以提高检测准确性 。
加样：在酶标板上精确设置标准品孔、空白孔与待测样本孔。向标准品孔中加入 50μL 已稀释好的不同浓度标准品；待测样本孔加入 50μL 处理好的样本；空白孔则不加任何试剂 。加样完成后，立即向各孔中加入 50μL 生wu素标记的抗体，随后盖上膜板，轻轻振荡使其充分混匀，在 37℃环境下温育 45 分钟 。
温育与洗涤：温育结束后，甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡 30 秒后甩去洗涤液，并用吸水纸拍干，此洗涤操作需重复 4 次。若使用洗板机，洗涤次数应增加一次 。
后续反应与检测：每孔加入 100μL 亲和链酶素 - HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育 30 分钟。再次重复上述洗涤步骤 。接着，每孔加入底物 A、B 各 50μL，轻轻振荡混匀，37℃温育 5 分钟 。之后，迅速向每孔加入 50μL 终止液，加入终止液后应立即使用酶标仪在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值 。依据标准曲线，计算出样本中 sTfR 的浓度，若样本进行过稀释，还需乘以相应的稀释倍数得到实际浓度 。
三、注意事项
试剂盒中的所有试剂在使用前必须充分平衡至室温，避免因温度差异影响检测结果的准确性 。
样本采集、处理过程务必严格遵循规范操作，防止样本受到污染或发生溶血、脂血等情况，以免干扰检测结果 。
洗涤过程至关重要，既要确保充分去除杂质，又要避免过度洗涤导致已结合的物质脱落 。
加样操作要精准、迅速，尽量缩短各孔之间的加样时间间隔，保证实验条件的一致性 。
实验完成后，应尽快读取 OD 值，避免因时间过长导致结果出现偏差 。
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