粒细胞集落刺激因子( granulocyte colony- stimulating factor, G-CSF)是肿瘤病人化疗后提升白细胞的标准疗法,其中重组人粒细胞集落刺激因子( recombinant human granulo-cyte colony-stimulating factor, rhG-CSF)已经广 泛应用于化疗和放疗引|起的白细胞数减少症。成熟的内源性人粒细胞集落刺激因子( G-CSF)由174个氨基酸构成,分子量为18-20kDa。利用基因工程技术,Amgen公司在1991年上市了大肠杆菌发酵的短效版G-CSF非格司亭(Neupogen),2001年 上市了长效版G-CSF培非格司亭( Pegfilgrastim, Neulasta) 。Neupogen和Neulasta两者的区别在于长效版使用了PEG的修饰技术,使CSF的分子量和体积变大,延长了半衰期,从而把化疗周期内的注射次数从7-10次减少到1次注射,增加了临床使用的便利。
PEG修饰使蛋白相邻电荷态之间叠加非常严重18.4,为了降低蛋白电荷数,需要在色谱流动相中使用三氟乙酸(TFA),取代常用的甲酸(FA),使样品m/z向高质量端移动,从而减少相邻电荷态之间的信号叠加;在质谱中PEG修饰的蛋白会发生去PEG化,为了避免此种情况,要在柱后添加三乙基胺( TEA); TEA同时也可以起到降低蛋白电荷态的作用问。
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