数据非依赖性的扫描模式(data-independent acquisition, DIA)是
近几年来发展的一种新的质谱数据采集方式 [1] 。它的理念是用二
级碎片离子进行蛋白相对/定量。DIA 扫描模式中,超高分辨
质谱对特定质量范围内的所有母离子进行碎裂,采集所有母离
子的碎片离子,并快速地依次扫描相邻的母离子宽口内的所有碎
片离子。DIA 的数据中包含了所有碎片离子的保留时间和强度信
息。用非常小的质量偏差宽口(如 10 ppm)目标性地抽提同一
肽段的多个子离子,计算子离子的强度,就能对该肽段进行鉴定
和定量。DIA 定量相比传统的基于母离子强度的 DDA 定量有选
择性好,定量准确等优点 [1] ,所以 DIA 成为定量蛋白组学新的发
展方向。
Q Exactive HF 是赛默飞世尔科技在 2014 年的 ASMS 上推出的全
新静电场轨道阱超高分辨质谱仪(图 1) [2,3] 。Q Exactive HF 采用
了分段式四极杆技术(Advanced Quadrupole Technology,AQT)
使离子传输效率至少提高了 2 倍;超高场 Orbitrap 技术,提高了
Orbitrap 扫描速度,在 15000 分辨率时,二级谱图的扫描速度是
20 Hz。这两项技术提高了 QE HF 进行 DDA、DIA 数据的采集能
力。本文用 1 小时快速色谱梯度对 QE HF 的 DDA 鉴定能力和 DIA
定量能力进行考察,同时从定量肽段数目和 CV 两方面对 DDA 定
量和 DIA 定量能力进行比较。
使用仪器:Q Exactive HF
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