产品简介：

真核细胞的 RNA 存在于三个部位，第一个部位是细胞核，主要是刚转录出来的各种RNA 前体。第二个部位是细胞浆，主要是用做翻译模板的成熟 mRNA、rRNA、tRNA 和miRNA 等。第三个部位是线粒体和叶绿体这些细胞器，它们有自己独立的 RNA。在某些研究中，需要分部位纯化 RNA。本产品就是专门满足此类需求的试剂盒。

产品特点：

1.采用专用膜裂解液，依次分离细胞浆、细胞器裂解液和细胞核三个组分，分别用于提  取对应的 RNA。

2.起始材料为培养的哺乳动物细胞，如 HEK293、HeLa 和 HT1080，但不适用于实体组织和有细胞壁的真菌细胞和植物细胞。

3.基于异硫氰酸胍的沉淀法提取，RNA 回收率高，基因组 DNA 污染少。

4.得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 杂交、cDNA 合成等实验

5.性价比高于进口的柱式 RNA 提取产品。

6.本产品足够 50 次细胞浆 RNA 纯化、50 次细胞器 RNA 纯化和 50 次细胞核 RNA 纯化。一次提取需要 1E6-1E7 个哺乳动物培养细胞。

7.细胞核细胞浆细胞器RNA纯化试剂盒只能用于科研。

产品参数：

成分规格包装

细胞膜专用裂解液20 mL30 mL 本色瓶

细胞器专用裂解液20 mL30 mL 本色瓶

CI 混合液50 mL60 mL 棕玻瓶

核酸沉淀剂 B 型150 mL250 mL 本色瓶

RNA 洗脱液10 mL10 mL 本色瓶

使用手册1 份无

成分编号规格包装

动物 RNA 提取液250 mL250 mL 棕玻瓶

使用手册1 份无

运输及保存

常温运输和保存，动物 RNA 提取液需要放 4℃长期保存，有效期一年。

自备试剂

PBS、胰-酶溶液（0.25% 胰-酶、0.9 mM EDTA）、75%乙醇。

使用方法：

一、细胞的准备（本试剂盒不含本步相关试剂）

1.在直径 10 cm 的培养皿（面积为 55 平方厘米）中培养贴壁细胞到 80%融合度，去掉培养基，用常温自备 PBS 洗涤贴壁细胞。

2.加入 0.8 mL 胰-酶溶液处理（0.25% 胰-酶、0.9 mM EDTA）37℃保温直到细胞分散（至少 2 分钟）。

3.加入 5 mL 含 10%胎牛血清的培养基终止胰-酶消化，然后将细胞转移到离心管中。

4.4℃ 500×g 离心 10 分钟，小心去上清液。

5.加入 0.5 mL 预冷 PBS 重悬细胞并转移到 1.5 mL RNase-free 离心管中。

6.4℃ 500×g 离心 10 分钟，小心去上清液。

二、细胞浆裂解样本的准备

7.在细胞沉淀中加入 400 L 预冷的细胞膜专用裂解液。

8.在 4℃冷室的脱色摇床上端对端摇晃 10 分钟以确保细胞膜完-全裂解。9. 4℃ 2000×g 离心 10 分钟。

10.小心将上清液均分到两个 1.5 mL RNase-free 离心管中，分别加入 1 mL 动物 RNA提取液，涡旋震荡 30 秒，标记为细胞浆 RNA，室温放置待用（跟后面的细胞器裂解样本和细胞核裂解样本一起纯化）。

三、细胞器裂解样本的准备

11.在上步的沉淀（含细胞核和细胞器）中加入 400 L 预冷的细胞器膜专用裂解液。

12.在 4℃或冰上放置 30 分钟以确保细胞器膜完-全裂解。13. 4℃ 7000×g 离心 10 分钟。

14.小心将上清液（细胞器裂解液）均分到两个 1.5 mL RNase-free 离心管中，分别加入 1 mL 动物 RNA 提取液，涡旋震荡 30 秒，标记为细胞器 RNA，室温放置待用（跟后面的细胞核裂解样本一起纯化）。

四、细胞核裂解样本的准备

15.在上步的沉淀（含细胞核）中加入 1 mL 动物 RNA 提取液，涡旋震荡 30 秒，室温放置 10 分钟。离心管标记为细胞核 RNA。

16.跟上面的两个样本共 5 管一起进入下一步操作。五、RNA 纯化

17.在装有裂解物-动物 RNA 提取液混合物的 5 个离心管中分别加入 0.2 mL CI 混合液，

振荡器上充分振荡混均 30 秒。注意：一定要把官底的溶液震荡起来，否则只是液面的振动。

18.14000×g 室温离心 3 分钟。

19.将上清液（约 0.6 mL）转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中。下层有机相（蓝色）和中间层含有 DNA 和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和 DNA 污染。为保险起见，可以留下 50-100 L 上清液不取。

20.在上清液中加入等体积的核酸沉淀液 B 型，振荡器上振荡 30 秒混匀。

21.14000×g 室温离心 5 分钟，离心底的侧面将形成 RNA 沉淀。

22.小心吸弃上清液，注意不要吸弃 RNA 沉淀。

23.在含 RNA 沉淀的离心管中加入 1 mL 自备的 75%乙醇，振荡混匀 30 秒。

24.14000×g 室温离心 3 分钟。

25.小心吸弃上清液，注意不要吸弃 RNA 沉淀。

26.短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留乙醇(约 50 L)。注意不要吸弃 RNA 沉淀。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响 RNA 的后续使用。

27.室温放 1-2 分钟后立即加入 50-100 L RNA 洗脱液使 RNA 沉淀溶解。千万不要用真空离心法使 RNA 沉淀过于干燥，否则 RNA 将变得十分难溶。RNA 样品可以立即

用于电泳、OD 测定、RT-PCR 或存放于-80℃待用。

选择我们的细胞核细胞浆细胞器RNA纯化试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！