产品简介：

RT-LAMP MasterMix（荧光染料法）含有荧光 RT-LAMP 扩增所需的所有成分， 可以用于实时荧光 RT-LAMP 等温扩增。 RT-LAMP 即 Revers Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification（逆转录-环介导等温扩增），它利用 4 条模板专一的特异引物、逆转录酶和具有链置换能力的 Bs DNA 聚合酶，在等温条件下(65℃左右)30－60 分钟完成逆转录和 LAMP 扩增该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于定性 RT-PCR 技术，还不需要昂贵的仪器设备。目前已成功应用于生物的快速检测，广泛用于各  个领域。

产品特点：

1.即开即用，含有 LAMP 专用的荧光染料，可以进行实时荧光检测（需要荧光 PCR 仪），但不建议用于定量分析。

2.含 UNG 防污染系统。

3.高特异性，精心优化的配方，非特异扩增比自配的试剂更低。

4.高扩增效率，一般比 RT-PCR 灵敏一个数量级。

5.65℃左右同时完成逆转录和等温扩增，一步式操作。

6.本试剂盒足够 50 次 20 L 体系的实时荧光 RT-LAMP 扩增。

7.提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。

8.20 L 体系最多可以使用 13 L 样本，减少漏检。

9.UNG RT-LAMP MasterMix（荧光染料法）只能用于科研，不能用于临床。

产品参数：

产品规格

成份规格包装

UNG RT-LAMP MasterMix

（荧光染料法，待加酶）200 L0.5 mL 黄盖管

逆转录酶-扩增酶混合液100 L0.5 mL 红盖管

LAMP阳性对照模板-引物混合物

22040250 L0.5 mL 蓝盖管

超纯水，PCR 级1 mL1.5 mL 本色盖

石蜡油，PCR 级1.5 mL1.5 mL 本色盖

使用手册1 份无

保存和运输

低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂

RNA 模板、RT-LAMP 引物

使用方法：

1. 制备模板RNA：用于选用合适的方法制备模板RNA。如果有N个样品，最好设置N+2个样品制备，多出的两个一个是样品制备阳性对照，一个是样品制备阴性对照。

2.配制20×RT-LAMP引物混合液。

先加超纯水将合成的HPLC级别的下列引物干粉稀释到下表所标注的母液浓度，然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物母液和超纯水，

最后得到0.1 mL的20×RT-LAMP引物混合液，此混合液足够100次20 L体系的RT-LAMP扩增。如果需要配制的20×RT-LAMP引物混合液体积异于0.1 mL，则各成分的用量请按比例调整。引物混合液可以在-20℃放置2 年。

注：如果没有Loop引物，则用水替代。

3.在冰上融化RT-LAMP MasterMix（荧光染料法，待加酶），混匀，稍离心。第一次使用时，请将100 L逆转录酶-扩增酶混合液全部加入到RT-LAMP MasterMix中并轻柔颠倒混匀1分钟，然后再使用。如果有N个样品，则在

N+2个反应管中加入以下组份， 多出的一管是RT-LAMP扩增阳性对照

（PC），一管是RT-LAMP扩增阴性对照（NC）：

成份N+2 个样品管RT-LAMP

扩增 PCRT-LAMP

扩增 NC

UNG RT-LAMP MasterMix

（荧光染料法，加酶后）6 L6 L6 L

自备 20×RT-LAMP

引物混合液1 L不加1 L

阳性对照模板-引物混合物不加4 L不加

自备 RNA 模板1-13 L不加不加

补自备超纯水到20 L20 L20 L

4.混匀，放荧光定量PCR仪器上65℃保温90分钟，每分钟采集一次SYBR通道的荧光信号。

5.反应结束后，按下面的步骤处理和分析数据。

6.阈值的设定：LAMP 的阈值跟 LAMP 引物的专一性密切相关，因此新设计的引物需要先在不加模板的情况下进行 LAMP 扩增，测定其 Ct。Ct 最好没有，如果有也最好不要低于 60（每分钟采集一次荧光信号的话）。如果低于 60，则最好重新设计引物。

7.实验有效性的判断：如果阈值设定为 60，则样品制备阳性对照和扩增阳性对照的 Ct 应该在 60 以内，样品制备阴性对照、无模板阴性对照和无引物无模板阴性对照的 Ct 应该大于 60，否则提取实验或扩增实验无效。对无效的实验不需要分析样品的结果，需要寻找原因或跟厂家联系。

8.如果实验有效，则可以分析样品的数据。样品 Ct 小于阈值则判读为阳性，大于阈值则判读为阴性。

选择我们的UNG RT-LAMP MasterMix（荧光染料法），就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！