产品简介：

烟粉虱(Bemisiatabaci)是世界性的农业害虫，能传播 30 多种植物上的 70多种病毒病。烟粉虱感染的主要症状是感病后植株矮化、黄化、褪绿斑驳及卷叶；有的作物叶片变小，叶面皱缩，中部稍凸起，边缘上卷，叶缩成球型。多种研究证明，烟粉虱是许多蔬菜病毒病的重要传毒介体，尤以传播双体病毒组的病毒最甚，传播种类多达 40 余种；烟粉虱以持久性方式传毒，在有毒寄主植物上取食10-60 分钟后就可传毒，一旦获得毒性，就可连续传毒 20 天。烟粉虱的寄主植物广泛，爆发时威胁农作物的正常生长发育，还会传播植物病毒病，造成农作物  减产甚至绝产的严重后果。因此快速检测烟粉虱具有重要的意义。本产品就是以  探针法 qPCR 技术为基础开发的专门检测烟粉虱的试剂盒。

产品特点：

1.即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。

2.引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到 100 拷贝/L。

3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4.特异性高，引物是根据烟粉虱 DNA 高度保守区设计，不会跟其他的 DNA 发生交叉反应。

5.既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为 5 个数量级。

6.本产品足够 50 次 20 L 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。

7.烟粉虱探针法荧光PCR试剂盒只能用于科研。

产品参数：

产品规格

50T/盒，可满足一定规模的检测需求。

检测方法

实时荧光PCR，具有快速、准确、灵敏等优点。

试剂盒成分

2×Probe qPCR MasterMix、荧光 PCR 专用模板稀释液、超纯水、烟粉虱探针法 qPCR 引物-探针混合干粉、烟粉虱探针法 qPCR 阳性对照(1E7 拷贝/μL)、使用手册。

自备试剂

样品 DNA。

保存和运输

低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。

使用方法：

一、稀释标准曲线样品（以 10E1-10E6 拷贝/ L 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能

污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本  产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2，1。

2.用带芯枪头分别加入 45 L 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头， 下同。

3.在 6 号管中加入 5 L 1×10E7 拷贝/L 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/L 的标准曲线样品。放冰上待用。

4.换枪头，在 5 号管中加入 5 L 1×10E6 拷贝/L 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/L 的标准曲线样品。放冰上待用。

5.换枪头，在 4 号管中加入 5 L 1×10E5 拷贝/L 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E4 拷贝/L 的标准曲线样品。放冰上待用。

6.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

7.如果有 N 个样品，最好设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性

对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10 L 上步所得 4 号稀释液再加上一定量的水使总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样本体积  一样，以此作为 PC。另外用水作为 NC。

8.用自选方法纯化样品DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA- 提取试剂盒兼容。

三、Probe qPCR 反应（20 L 体系，在样品制备室进行）

9.如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个

用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（用第 4 号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设  置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好  后最后加）：

成分样品管

N+2 个PCR 阴性

对照管标准曲线

样品管（1-6 管）

2×Probe qPCR MasterMix10 L10 L各 10 L

烟粉虱探针法

qPCR 引物-探针混合液3 L3 L各 3 L

N+2 个待测 DNA 模板7 L不加不加

超纯水不加7 L不加

第 6 步所得标准曲线样品稀释液

（1-6 号）

不加

不加各 7 L（1 号样到 1

号管，2 号样到 2 号管…）

11.盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR：

过程温度时间

预变性95℃2 min

PCR 反应

（45 个循环）95℃15 sec

58℃30sec（采集 FAM 通道的荧光

信号，淬灭基团为 TAMRA）

四、数据处理

12.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。

13.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照必须无 Ct 或 Ct 大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于 40，否则实验无效。如果实验有效，则分析待测样品，如果无

Ct 或 Ct 大于或等于 40，则为阴性。如果 Ct 小于 40 则为阳性。

选择我们的烟粉虱探针法荧光PCR试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！