产品简介：

口蹄疫病是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth Disease Virus, FMDV）引起偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，是我国农业部公布的一类动物疫病。牛，猪最易感染 FMDV，羊、骆驼、象等均有发病报告。该病可分为 O、A、C、南非 I 型、南非 II 型、南 III 型和亚洲 I 型等血清型，其中以 O 型和 A 型分布最-广，危害最大。

本试剂盒适用于检测样本中 O 型口蹄疫病毒 RNA，适用于 O 型口蹄疫病毒感染的辅助诊断。

产品特点：

一、严格的质控体系

所有试剂盒从原料到成品都经过严格的质量控制，确保每一盒试剂盒都具有稳定可靠的质量，让您的检测结果更可信。

二、高灵敏度

产品经过不断优化，具有出色的灵敏度，能够检测到极微量的口蹄疫病毒O型核酸，不放过任何潜在的感染风险。

三、便捷操作

综合各项指标特性，研发出操作便捷的试剂盒。从样本制备到结果分析，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能轻松上手。

四、多样的检测验证样本

该试剂盒经过多种样本的检测验证，适用于淋巴结、脊髓、扁桃体、心脏肌肉、骨胳肌等多种常见样本，满足不同的检测需求。

五、个性化定制服务

专业的研发团队可为您提供个性化的定制服务，根据您的特殊需求进行产品优化和调整，为您提供更贴合实际的检测方案。

六、丰富的产品线

除了口蹄疫病毒O型(FMDV-O)荧光PCR检测试剂盒，我们还提供Elisa试剂盒以及其它快检试剂盒，满足您在不同领域的检测需求。

七、完善的售前售后服务

我们拥有完善专业的售前售后服务团队，在您购买前为您提供详细的产品咨询和技术支持，购买后为您解决使用过程中遇到的任何问题，让您无后顾之忧。

产品参数：

产品规格

50T/盒，可满足一定规模的检测需求。

检测方法

实时荧光PCR，具有快速、准确、灵敏等优点。

适用仪器

ABI7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

标本采集

病死或扑杀动物，取淋巴结、脊髓、扁桃体、心脏肌肉、骨胳肌等组织和水泡皮、水泡液；待检活动物，采   集动物血液 5ml 至无菌离心管，反刍动物可取 O/P 液 2~3mL。

保存和运输

采集或处理好的样品在 2℃~8℃条件下保存应不超过 24 h；若需长期保存，应放置-70℃以下保存，冻融不超过 3 次。

使用方法：

1.样品处理（样本处理区）

1.1样本前处理

组织样本：将采集的动物机体组织，置组织匀浆器中充分研磨，加入青霉-素 1 000 IU/mL、链霉-素 500 IU/mL， 

0.04 mol/L PBS(pH 7.4)制成 1:5 的组织悬液，4℃浸毒过夜。次日以 3000 r/min 离心 10 min，取上清液备用；水泡皮样品：称取水泡皮0.5g 于研磨器中研磨，加入生理盐水继续研磨，待匀浆后转至1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；水泡液样品，以 3000 r/min 离心 10 min，取上清液备用； OP 液：将 O-P 液倒入灭菌塑料离心管内，再加入不少于样品 1/3 体积量的三氯三氣乙烧或氯仿。用高速组织匀浆机以 10 000 r/min 搅拌 3 min，然后以 3 000 r/min 离心 10min，此时液体分成两相，将上层水相分装入样品保存管中备用。

1.2核酸提取

推荐采用上海烜雅生物科技有限公司生产的核酸-提取或纯化试剂（离心柱法）进行核酸提取，请按照试剂说明书进行操作。

2.试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管数每满 10 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

试剂FMDV-O 反应液酶液

用量19μL1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，20μL/管。

3.加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

4.PCR 扩增（核酸扩增区）

4.1将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；

4.2设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；荧光通道选择：

检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光， 选择 None 即可。

4.3推荐循环参数设置：

步骤循环数温度时间收集荧光信号

11cycle50℃10min否

21 cycle95℃2min否

345 cycle95℃15sec否

60℃30sec是

5.结果分析判定

5.1结果分析条件设定（请参照各仪器使用说明书进行设置，以分析 ABI7500 仪器为例）

反应结束后自动保存结果，根据分析后图像调节 Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用户可根据实际情况自行调整，Start 值可设在 3～15、End 值可设在 5～20，使阈值线位于扩增曲线指数期，阴性质控品的扩增曲线平直或低于阈值线），点击 Analyze 自动获得分析结果。

5.2结果判断

阳性：检测通道 Ct 值≤40，且曲线有明显的指数增长曲线； 阴性：样本检测结果 Ct 值>40 或无 Ct 值。

5.3质控标准

阴性质控品：无特异性扩增曲线或无 Ct 值；

阳性质控品：扩增曲线有明显指数增长期，且Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

6.检测方法的局限性

1.样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；

2.样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；

3.阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；

4.病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；

5.不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；

6.试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；

7.本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

注意事项：

1.所有操作严格按照说明书进行；

2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完-全混匀并短暂离心；

3.反应液应避光保存；

4.反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；

6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

7.实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

9.本产品仅供科研。

选择我们的口蹄疫病毒O型(FMDV-O)荧光PCR检测试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！