产品简介：

猪圆环病毒（porcine circovirus，PCV）为无囊膜单股负链环状 DNA 病毒，根据其抗原性和基因组特性分为4 种基因型。猪圆环病毒 4 型（PCV4）是 2019 年在我国湖南省患有严重临床疾病的猪群中首-次发现的一种新型PCV，随后国内多个研究团队调查到国内各省份均存在 PCV4 的流行。PCV4 可以单独感染，又可与多种病毒混合感染任何年龄段的猪，其感染后可以导致宿主各器官组织，如肺、肝、淋巴结等产生明显病变，但其临床表征不明显，大部分为健康状态的亚临床状态。

本试剂盒适用于检测病死猪（包括流产的死胎）或扑杀猪主要脏器（淋巴结、脾脏、肺脏、肾脏和肝脏）、血清等样本中的猪圆环病毒 4 型感染的辅助诊断。

产品特点：

一、严格的质控体系

所有试剂盒从原料到成品都经过严格的质量控制，确保每一盒试剂盒都具有稳定可靠的质量，让您的检测结果更可信。

二、高灵敏度

产品经过不断优化，具有出色的灵敏度，能够检测到极微量的猪圆环病毒4型核酸，不放过任何潜在的感染风险。

三、便捷操作

综合各项指标特性，研发出操作便捷的试剂盒。从样本制备到结果分析，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能轻松上手。

四、多样的检测验证样本

该试剂盒经过多种样本的检测验证，适用于脏器（淋巴结、脾脏、肺脏、肾脏和肝脏）、血清等多种常见样本，满足不同的检测需求。

五、个性化定制服务

专业的研发团队可为您提供个性化的定制服务，根据您的特殊需求进行产品优化和调整，为您提供更贴合实际的检测方案。

六、丰富的产品线

除了猪圆环病毒4型(PCV-4)PCR核酸检测试剂盒，我们还提供Elisa试剂盒以及其它快检试剂盒，满足您在不同领域的检测需求。

七、完善的售前售后服务

我们拥有完善专业的售前售后服务团队，在您购买前为您提供详细的产品咨询和技术支持，购买后为您解决使用过程中遇到的任何问题，让您无后顾之忧。

产品参数：

产品规格

50T/盒，可满足一定规模的检测需求。

检测方法

实时荧光PCR，具有快速、准确、灵敏等优点。

适用仪器

ABI7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

标本采集

组织样品采集：采取病死猪（包括流产的死胎）或扑杀猪主要脏器（淋巴结、脾脏、肺脏、肾脏和肝脏）   装入灭菌 15 mL 离心管中，编号，送实验室。血清样品采集：用无菌-注射器抽取受检猪静脉血不少于 5 ml，置

于无菌离心管内，室温或者 37℃倾斜放置自然凝集 20 min ~30 min，2 000 r/min~3 000 r/min 离心 10 min，吸取上清液到新的离心管内备用。精液样品采集：按照 GB/T 25172 的方法采集和保存精液。粪便样品采集：取猪新鲜粪便 1g，装入 15mI 灭菌离心管中，加入 5mL PBS，混匀。细胞培养物：细胞培养物反复冻融 3 次，第 3 次解冻后，将细胞培养物置于 1.5 mL 无 DNA 酶的灭菌离心管内，编号备用。

保存和运输

采集或处理好的样品在 2℃~8℃条件下保存应不超过 24 h；若需长期保存，应放置-70℃以下保存，冻融不超过 3 次。

使用方法：

1.样品处理（样本处理区）

1.1样本前处理

组织样品：取 1g 解冻的组织，剪碎，加入 2 mL PBS 进行研磨，制备组织匀浆，8000 r/min 离心 5 min，取上清用于后续的核酸提取。血清和精液样品无需进行前处理，直接用于核酸提取。粪便样品：3000 r/min 离心10 min，取上清液，转入 1.5 mL 离心管中，用于后续的核酸提取。细胞培养物：4000 r/min，4℃离心 l0 min， 取上清用于后续的核酸提取。

1.2核酸提取

推荐采用上海烜雅生物科技有限公司生产的核酸-提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提取， 请按照试剂说明书进行操作。

2.试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管数每满 10 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

试剂PCV-4 反应液酶液

用量19μL1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，20μL/管。

3.加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀， 短暂离心。

4.PCR 扩增（核酸扩增区）

4.1将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；

4.2设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；荧光通道选择：检测通道（ReporterDye）FAM，淬灭通道

（QuencherDye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。

4.3推荐循环参数设置：

步骤循环数温度时间收集荧光信号

11 cycle95℃2min否

245 cycles95℃15sec否

60℃30sec是

5.结果分析判定

5.1结果分析条件设定（请参照各仪器使用说明书进行设置，以分析 ABI7500 仪器为例）

反应结束后自动保存结果，根据分析后图像调节 Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用户可根据实际情况自行调整，Start 值可设在 3～15、End 值可设在 5～20，使阈值线位于扩增曲线指数期，阴性质控品的扩增曲线平直或低于阈值线），点击 Analyze 自动获得分析结果。

5.2结果判断

阳性：检测通道 Ct 值≤40，且曲线有明显的指数增长曲线； 阴性：样本检测结果无 Ct 值，且无特异性扩增曲线；

可疑：样本检测结果 40＜Ct 值≤45，建议重复检测，如果检测通道仍为 40<Ct 值≤45，且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性。

5.3质控标准

阴性质控品：无特异性扩增曲线或无 Ct 值显示；

阳性质控品：扩增曲线有明显指数增长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

6.检测方法的局限性

1.样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；

2.样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；

3.阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；

4.病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；

5.不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；

6.试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；

7.本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

注意事项：

1.所有操作严格按照说明书进行；

2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完-全混匀并短暂离心；

3.反应液应避光保存；

4.反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；

6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

7.实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

9.本产品仅供科研。

选择我们的猪圆环病毒4型(PCV-4)PCR核酸检测试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！