产品简介：

副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis, HPS）常引起猪的多发性浆膜炎、关节炎以及脑膜炎，该菌引起的病叫副猪嗜血杆菌病，又称为猪格拉泽氏病。本菌可感染2周龄-4月龄的猪发病，5-8周的断奶后和保育阶段猪多发，发病率一般在10％-15％，严重时死亡率可达50％。感染猪临床症状主要表现为发热、呼吸困难、关节肿胀、跛行、皮肤及粘膜发绀、耳尖发紫，站立困难甚至瘫痪。建立早期快速检测方法对副猪嗜血杆菌感染的预防和控制具有十分重要的意义。

本试剂盒适用于检测气管分泌物拭子、肺组织、关节液等样本中的副猪嗜血杆菌，用于副猪嗜血杆菌感染的辅助诊断。

产品特点：

一、严格的质控体系

所有试剂盒从原料到成品都经过严格的质量控制，确保每一盒试剂盒都具有稳定可靠的质量，让您的检测结果更可信。

二、高灵敏度

产品经过不断优化，具有出色的灵敏度，能够检测到极微量的副猪嗜血杆菌核酸，不放过任何潜在的感染风险。

三、便捷操作

综合各项指标特性，研发出操作便捷的试剂盒。从样本制备到结果分析，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能轻松上手。

四、多样的检测验证样本

该试剂盒经过多种样本的检测验证，适用于肺病变部位或病变/非病变部位交界处的样品；生猪灭菌棉拭子沾取气管分泌物等多种常见样本，满足不同的检测需求。

五、个性化定制服务

专业的研发团队可为您提供个性化的定制服务，根据您的特殊需求进行产品优化和调整，为您提供更贴合实际的检测方案。

六、丰富的产品线

除了副猪嗜血杆菌(HPS)检测试剂盒(荧光PCR法)，我们还提供Elisa试剂盒以及其它快检试剂盒，满足您在不同领域的检测需求。

七、完善的售前售后服务

我们拥有完善专业的售前售后服务团队，在您购买前为您提供详细的产品咨询和技术支持，购买后为您解决使用过程中遇到的任何问题，让您无后顾之忧。

产品参数：

产品规格

50T/盒，可满足一定规模的检测需求。

检测方法

实时荧光PCR，具有快速、准确、灵敏等优点。

适用仪器

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

标本采集

病死或扑杀猪，无菌采集肺病变部位或病变/非病变部位交界处的样品；生猪灭菌棉拭子沾取气管分泌物，放入无菌试管中；若有关节囊肿，在囊肿表面常规碘-酊消毒，用2mL或5mL灭菌注射器穿刺，无菌吸取1~2mL关节渗出液。

保存和运输

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输， 严禁反复冻融。

使用方法：

1.样品处理（样本处理区）

1.1样本前处理

组织样品：每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g，手术-剪剪碎混匀后取0.5g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中；关节渗出液，直接取100μL进行提取。

1.2DNA提取 

1)DNA的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生产的DNA-提取试剂盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。

2.试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照；样品每满7份，多配制1份)，每测试反应体系配制如下表：

试剂HPS反应液酶液

用量（样本数为N）20μL1μL

将混合好的测试反应液分装到PCR反应管中，21uL/管。

3.加样（样本处理区）

将步骤1提取的DNA、阳性质控品、阴性质控品各取4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

4.PCR扩增（核酸扩增区）

4.1将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内；

4.2设置好通道、样品信息，反应体系设置为25μL；

荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，请勿选择ROX参比荧光。

4.3推荐循环参数设置：

步骤循环数温度时间收集荧光信号

11 cycle95℃10min否

240 cycles94℃15sec否

55℃30sec是

5.结果分析判定

5.1结果分析条件设定

设置Baseline和Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节Baseline的start值(一般可在3~15范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节)，以及Threshold的Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

5.2结果判断

阳性：检测通道Ct值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线；

可疑：检测通道35<Ct值≤38，建议重复检测，如果检测通道仍为35<Ct值≤38，且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性；

阴性：样本检测结果Ct值>38或无Ct值。

6.质控标准

阴性质控品：Ct值>38或无Ct值；

阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且Ct值≤32；

以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

7.检测方法的局限性

7.1样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；

7.2样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；

7.3阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；

7.4病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；

7.5不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；

7.6试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；

注意事项：

1.所有操作严格按照说明书进行；

2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完-全混匀并短暂离心；

3.反应液应避光保存；

4.反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；

6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

7.实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

9.本产品仅供科研。

选择我们的副猪嗜血杆菌(HPS)检测试剂盒(荧光PCR法)，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！