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上海语纯生物科技有限公司
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产品简介
| 供货周期 | 现货 | 规格 | 10 ×50ul/100×50ul |
|---|---|---|---|
| 货号 | EC96305 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,制药/生物制药 |
产品货号：EC96305
产品规格：10 ×50ul/100×50ul
本产品仅供科学研究或进一步生产使用，不可用于临床诊断或治疗。
产品介绍
GV3101（pSoup）（电转）
产品简介
GV3101(pSoup)菌株为 C58 型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因
Rif，为了便于转化操
作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型 Ti质粒 pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此质粒含有 vir基因 (vir
基因是 T-DNA 插入植物基因组必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的 T-DNA 转移功能被破
坏，但可以帮助转入的双元载体 T-DNA 顺利转移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型 Ti 质粒含有筛选标签：
Gent，赋予 GV3101 菌株庆大霉素抗性；在 GV3101 菌株中转入 help 质粒：pSoup 即为 GV3101(pSoup)
菌株，可帮助 pGreen，62SK，pGs2 系列质粒在农杆菌中复制，同时赋予该菌株四环素（Tet）抗性。适
用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。本公司开发的 GV3101(pSoup)电转感受态特别适
用于大质粒的转化：经 pGs2(卡那霉素抗性)质粒检测转化效率>105 cfu/μg DNA。
产品组成
组分
GV3101（pSoup）
电转感受态细胞
10 × 50μL
100 × 50μL
定制
基因型：C58 (RifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( GentR) Nopaline(pSoup-TetR)
存储条件
-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
质量控制
除胭脂碱型 Ti 质粒 pMP90 和 pSoup 质粒外，无外源质粒 DNA 残留；
电转法转化效率≥105 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 将新的 2 mm 电击杯插入冰中预冷；或者将储存于 75%乙醇中的 2 mm 电击杯和杯盖取出，在超净工
作台中将其倒置于干净的吸水纸上，使乙醇充分挥发，然后插入冰中预冷；
2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中待其融化，加入 0.01-1μg 质粒 DNA（体积不大于 5μl），用
200μl 枪头将感受态-质粒混合物快速转移到预冷的电击杯中，盖上杯盖；
3. 开启电转仪，设置参数（2500 V ，200 Ω，25μF），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成后快速插
入冰中，加入 900 μl 无抗生素的 YEB 并将感受态细胞转移到无菌空管中，28 ℃振荡培养 2~3 小时。
（注：此电转化参数为 Bio-rad 推荐，使用者也可使用电转仪所推荐的 Protocol 进行操作）
4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清将菌体轻轻吹匀，并涂布于含相应抗生素的 YEB 平板
上，倒置放于 28℃培养箱培养 2~3 天（当平板只含有 50μg/ml Kan 时，28℃培养 48 h 即可；平板中同时
加入 50μg/ml Kan，20μg/ml Rif 时，需 28℃培养 60 h；如果使用的平板含有 50μg/ml Rif 时，则需要 28 ℃
培养 72~90 h）。
注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用；
2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；
3. 利福平浓度不应高于 25μg/μl，利福平浓度过高不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。
4. 由于 Ti 质粒丢失的概率极低（可以忽略），所以相关抗性基因可以不用添加。
GV3101（pSoup）（电转）
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