E.G7-OVA 小鼠 T 淋巴瘤细胞

E.G7-OVA 小鼠 T 淋巴瘤细胞

E.G7-Ova

细胞鉴定种属鉴定

细胞来源国家资源库

细胞背景来源于 C57BL/ 6（H-2 b）小鼠淋巴瘤细胞系 EL4（见 BCRC 60179），EL4 细胞通过电穿孔转染质粒 pAc-neo-OVA，质粒 pAc-neo-OVA 携带鸡卵清蛋白（OVA）mRNA 和新霉素（G418）抗性基因的完整 拷贝;E.G7-OVA 细胞含有插入质粒的单个拷贝，并组成性地合成和分泌 OVA;用 E.G57-OVA 细胞免疫的 C6BL/ 7 小鼠产生对 OVA 2-258 肽特异性的 H-276 Kb 限制性细胞毒性淋巴细胞;该细胞系是研究小鼠细胞毒性 T 淋巴细胞主要组织相容性复合体（MHC）I 类限制反应的模型系统。

细胞特性形态：淋巴母细胞，悬浮生长

用途：仅供科研使用。

培养条件1）准备 1640 培养基与 2 mM L-谷氨酰胺调整为含有 1.5 g/ L 碳酸氢钠，4.5 g/ L 葡萄糖，10 mM HEPES 和 1.0 mM 丙酮酸钠，并添加 0.05 mM 2-Mercaptoethanol和 0.4 mg/ ml G418，90%;胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5% 。 温度：37 摄氏度，培养箱湿度为 70%-80%。

注意事项常温发货：收到后 T25 瓶消毒再放置培养箱静置 2-3 小时后观察密度和状态拍照 2-3 张反馈给销售， 密度达标就可以传代。前期传代比例 1:2 ，等再次长满后传代时建议冻存其中一整瓶成 1 个 1ml 冻存管，另外一瓶继续传代，反复冻存 2-3 只后才扩增做实验，以防突发情况引起断种。

干冰发货：常规细胞发货冻存管 2 只，复苏 1 只，另外一只备用，第一个复苏不成功时严格按照厂家要求复苏第二个，均没有复苏成功的情况即时留存复苏照片通知销售。

贴壁细胞参考：

1.  弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2.  加入 0.25％（w / v ）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA 于培养瓶中（T25 瓶 1-2mL，T75 瓶 2-3mL），置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入 3-4ml 含 10%FBS 的培养基来终止消化。

3.轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 3-5min ，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。将 细胞悬液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶/6cm 培养皿中，添加 6-8ml 按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2~1:5 的比例进行。

3）细胞冻存:  收到细胞后建议在培养前 3 代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

4）运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的培养基来培养细胞。

悬浮细胞参考：

悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下 细胞密度维持在 1×105~1×106 个/mL（不同细胞对密度要求不同，）可以维持细胞的正常生长。如 需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中 1000rpm ，离心 5min ，弃去上清，补加 1-2mL 培养液后重 悬混匀后将细胞悬液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml 按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2~1:4 的比例进行。

细胞培养：

1）冻存细胞的复苏：

将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含 4-6mL 培养基的离心管 中混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 3-5min ，弃去上清液，培养基重悬细胞。然后将细胞悬 液加入含 6-8ml 培养基的培养瓶（或皿）中 37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达 70%-90% ，即可进行传代培养。

此细胞为悬浮细胞，传代可参考以下方法：

悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下 细胞密度维持在 1×105~1×106 个/mL（不同细胞对密度要求不同，）可以维持细胞的正常生长。如 需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中 1000rpm ，离心 5min ，弃去上清，补加 1-2mL 培养液后重 悬混匀后将细胞悬液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml 按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2~1:5 的比例进行。

3） 细胞冻存:  收到细胞后建议在培养前 3 代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

运输形式： 低温：1mL 冻存管包装干冰运输，收到后-80 度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

常温: T25 瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

生物安全： 1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

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