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诺博莱德 叶绿体蛋白提取试剂盒

NobleRyder P5058 叶绿体蛋白提取试剂盒（蛋白组实验、质谱适用）-酶法

产品货号：P5058

产品名称：叶绿体蛋白提取试剂盒（蛋白组实验、质谱适用）-酶法

产品规格：50T/100T

叶绿体蛋白提取试剂盒-常备现货

产品简介：

中文名称：叶绿体蛋白提取试剂盒（蛋白组实验、质谱适用）-酶法

规格：100T ; 50T

储存条件：2-8℃，1 year

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyder P5058 叶绿体蛋白提取试剂盒（蛋白组实验、质谱适用）-酶法

叶绿体是植物细胞所te有的能量转换细胞器，光合作用就是在叶绿体中进行的,由于具有这一重要功能，所以叶绿体一直是细胞生物学、遗传学和分子生物学的重要研究对象。叶绿体提取试剂盒用简便快速的方法即可从各种植物样本中快速提取得到叶绿体总蛋白。本试剂盒适用于提取新鲜植物样本的叶绿体蛋白，用于冻存样本的提取时由于冻存过程中大部分叶绿体会被破坏，叶绿体蛋白回收率较低。本试剂盒含有的du特配方能够有效溶解叶绿体膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒采用酶法提取，酶法提取制备的叶绿体，回收率提高，纯度高，但是耗时较长。非酶法的提取试剂盒提取过程简单方便，速度快，可在1小时内完成，而且绝少交叉污染，但是回收率相比酶法较低。如果需要更加快捷的提取试剂盒，可以选择非酶法的提取试剂盒，对提取速度没有要求的话，可以选择酶法提取试剂盒。请根据实际需要选择试剂盒。本试剂盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gelshift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

适用样本：植物

注：

1. 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2. 蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3. 试剂拆封后请尽快使用完！

产品简介：

叶绿体是植物细胞所te有的能量转换细胞器，光合作用就是在叶绿体中进行的, 由于具有这一重要功能，所以叶绿体一直是细胞生物学、遗传学和分子生物学的重要研究对象。

叶绿体蛋白提取试剂盒用简便快速的方法即可从各种植物样本中快速提取得到叶绿体总蛋白。

本试剂盒适用于提取新鲜植物样本的叶绿体蛋白，用于冻存样本的提取时由于冻存过程中大部分叶绿体会被破坏，叶绿体蛋白回收率较低。

本试剂盒含有的du特配方能够有效溶解叶绿体膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒采用酶法提取，酶法提取制备的叶绿体，回收率提高，纯度高，但是耗时较长。非酶法的提取试剂盒提取过程简单方便，速度快，可在 1 小时内完成，而且绝少交叉污染，但是回收率相比酶法较低。如果需要更加快捷的提取试剂盒，可以选择非酶法的提取试剂盒，对提取速度没有要求的话，可以选择酶法提取试剂盒。请根据实际需要选择试剂盒。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。

本试剂盒中不含有 EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

本试剂盒提取的蛋白也用于 Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本试剂盒的蛋白提取组份中不含有不可透析除去的去垢剂组份，不含 SDS、TritonX-100、chaps 等可能影响质谱实验的组份，最后得到的蛋白质样品经过透析或者脱盐处理后将不含有去垢剂、高浓度盐等影响，基本可以满足下游任意的蛋白质组学相关实验研究。

本产品的蛋白酶抑制剂混合物中不含 AEBSF，可以避免由于 AEBSF 导致的质谱峰漂移，因此使用本产品提取的蛋白样品可以用于质谱(Mass Spectrometry, MS)检测和分析，蛋白质组学(proteomics)等相关研究。

自备试剂和仪器：

离心机、振荡器、匀浆器、涡旋混匀器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 缓冲液、蛋白定量试剂盒，离心管、吸头、一次性手套、100um 细胞筛。

使用方法：

一、使用注意事项：

1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2. 蛋白酶抑制剂在 2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或 37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

4. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

5. 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

6. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

二、叶绿体蛋白提取：

1. 提取液准备：

将试剂 C1 和试剂 C2 混合，配成蛋白提取液 C，充分混匀备用。每 500ul 蛋白提取液 C 中加入 2ul 蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

【注】：

1) 蛋白提取液 C 置 4℃保存，长期不用的可以分装后-20℃保存。

2) 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

3) 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。

2. 取 1g 新鲜植物样本叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉。用手术jian刀尽可能剪碎。

3. 加入 2ml PBS 用组织搅碎机/匀浆机/匀浆器充分匀浆。

4. 将匀浆用 100um 细胞筛过滤。

【注】：

1) 没有细胞筛的话，在 4℃，稍微静置，让粗纤维，成团组织块等沉降，收集细胞上清，弃组织沉淀。

2) 有些含黏液较多的样品可能难以吸取，可以将 1ml 吸头尖稍微剪掉一点使用。

5. 将滤液在 3000×g 条件下离心 10 分钟，收集沉淀。

6. 在沉淀中加入 500ul 提取液 A，充分混匀

【注】：

1) 培养细胞可以在 1000×g 条件下离心 5 分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细

胞后用 PBS 洗涤 2 次，然后直接加入提取液 A 重悬。

2) 大约每 300ul 细胞压积（沉淀体积）中加入 1ml 提取液 A。

7. 将悬液置振荡器上 37℃或室温振荡 12-72 小时。

【注】：

1) 使用振荡器/摇床的较低转速，保证提取液能轻微晃动即可。

2) 没有振荡条件也可以不振荡，中间每隔几小时用移液器吹打混匀即可。

3) 根据下游叶绿体的应用选择合适的温度。最高可以至 55℃，提高温度至 55℃可以缩短试剂 A 处理时间。

4) 不同类型的植物样本需要处理的时间差异较大。拟南芥较易处理，鲜嫩叶片较易处理，年龄小的样本处理时间短。

5) 部分细胞壁较厚的植物类型可能需要处理更长时间。可以延长至 72 小时以上处理以提高叶绿体得率。

8. 在 3000×g 条件下离心 10 分钟，弃上清，收集沉淀。

9. 在沉淀中加入 0.5ml 提取液 B，充分混匀。

10. 置振荡器振荡 20 分钟。

【注】：

1) 使用振荡器/摇床的较低转速，保证提取液能轻微晃动即可。

2) 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀

即可。

11. 在 200×g 力离心 2 分钟。弃沉淀，取上清。

12. 在 800×g 力离心 2 分钟。弃沉淀，取上清。

13. 将上清 3000×g 力离心 10 分钟。弃上清，收集沉淀。

14. 在沉淀中加入 100-400ul 叶绿体蛋白提取液 C，充分混匀。

【注】：

1) 每 500ul 蛋白提取液 C 加入 2ul 蛋白酶抑制剂混合物。

15. 在 4℃条件下振荡 20-30 分钟。

【注】：

1) 试剂 C 处理时间根据预实验结果调整。至叶绿体充分裂解，离心后无明显大量叶绿体沉淀。

16. 在 4℃，12000×g 条件下离心 15 分钟。

17. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到叶绿体总蛋白。

18. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

【注】：

1) 建议用 BCA 法进行蛋白定量。

2) 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

19. 将蛋白样品透析处理或者脱盐柱脱盐处理后用于不能含有去污剂/盐的下游实验。

【注】：

1) 蛋白样品中含有盐，需要脱盐处理后用于双向电泳。

2) 经透析或脱盐离心柱处理的蛋白样品不含有去垢剂和高浓度盐。

注意事项：

1. 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得优良实验效果。

2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。

3. 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4. 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻di清除残留清洁剂。

6. 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

7. 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。

8. 避免皮肤或粘膜与试剂接触；如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

叶绿体蛋白提取试剂盒-常备现货

产品订购信息：

P5058  叶绿体蛋白提取试剂盒（蛋白组实验、质谱适用）-酶法  50T/100T