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K7M2-WT+LUC 小鼠骨肉瘤成骨细胞

细胞鉴定：种属鉴定已通过

细胞来源：国家资源库
细胞背景：C Khanna1998年建立，是合适的肿瘤模型。在 BALB/c 小鼠中形成肿瘤，并在超过 90% 的接种小鼠中自发转移到肺部。CD31 + Ref+。分泌型磷蛋白 1（骨桥蛋白）因子 VIII；整合素结合唾液蛋白 (BSP); 比利亚安; 装饰素；小人 2 (ezrin) 。骨唾液蛋白、biglyan、decorrin 和骨桥蛋白的表达提示骨谱系细胞。

细胞特性：
1） 来源：BALB/c 器官: 骨 疾病: 骨肉瘤 来源转移灶: 肺 细胞类型: 成骨细胞;

2） 形态：成骨细胞  贴壁生长

 用途：仅供科研使用
培养条件
：1） 准备DMEM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
注意事项:该细胞为稳定转染的细胞，随细胞传代次数的增加，其荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度，可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。建议收到细胞后至少传3代，冻存留种后再进行筛选。初次进行细胞筛选时，建议加入终浓度为1ug/ml嘌呤霉素的专用培养基维持培养，若无细胞漂浮或者漂浮较少，即可更换为含2ug/ml嘌呤霉素的专用培养基继续筛选，以此类推，至最高药物浓度为5ug/ml。若筛选过程中，漂浮细胞大于60%，则停止筛选，换成正常培养基培养，至细胞密度约80%，可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入5ug/ml嘌呤霉素时细胞正常增殖，可停止筛选，用不含药专用培养基正常培养。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 

3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的专用培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

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