注射剂是指药物制成的供注入体内的无菌溶液（包括乳浊液和混悬液）以及供临用前配成溶液或混悬液的无菌粉末或浓溶液。由于其给药途径的特殊性，其用药安全风险要高于其他普通口服制剂。据统计，在中国注射剂的使用率远高于其他发达国家，高达 65%，临床风险较高。

 

2013年2月，国家（CFDA）发布《关于开展仿制药质量一致性评价工作的通知》

2016年5，CFDA关于仿制药一致性评价的意见（2016年第106号）公示了2018年底前须完成仿制药一致性评价的289 个品种。

2017 年 12 月，国家食品药品审评中心（CDE）发布了《关于开展仿制药质量一致性评价工作的通知》和《已上市化学仿制药（注射剂）一致性评价技术要求（征求意见稿）》

 

我国正全力推进注射剂一致性评价工作，标示着注射剂开始走上一致性评价和提升药学研究的道路。2019年，将会有更多的品种要求仿制药一致性评价过程，更多的药企将面临巨大的工作量以保证药品符合国家要求。

头孢吡肟，作为一种新型第四代，对诸多革兰阳性和革兰阴性细菌有较强的抗菌活性。现已广泛应用于治疗敏感细菌所致的呼吸系统、泌尿系统、皮肤和软组织、骨与关节、妇产科感染。

图1 头孢吡肟的分子式

 

在此，本文推荐一种新型电雾式检测器（CAD），从辅料的含量、主成分及其成盐离子比例，以及杂质谱对比分析，对注射用头孢吡污进行了分析，初步评价了仿制药物与原研药物的一致性。

 

什么是电雾式检测器（CAD）？

电雾式检测器（CAD）是一款新型通用型检测器，它灵敏度高，重现性好，能为难挥发化合物提供一致性响应！因此能够更为准确的用于定量分析或半定量分析，定量大部分非挥发性和半挥发性的有机物，成为了药物分析的宠儿。2015年和2018年的美国药典论坛（USP PF）以及2016年的欧洲药典（EP），均发布了用电雾式检测器（CAD）测定的方法。

 

图2  电雾式检测器（CAD）

 

UV检测器结果

药物一致性评价，主要对药物杂质组成和含量进行分析，它既是保证药物安全性的重要方面，同时其杂质谱也是也反映原料药物工艺手段之一。本文的工作是选取仿制药物和参比制剂进行杂质谱的比较，参考《USP40 Cefepime Injection》方法进行对比分析，结果在 UV254nm 下串联CAD检测器，从上述的两个方面比较仿制药与参比制剂的差异性。UV254nm测试结果见图 3。

图3  参比制剂 (A)；仿制厂家1#的两种规格(B)、(C)；仿制厂家 2# (D)，在 UV254nm 叠加谱图

 

如图3，在 UV254nm 下，仿制药厂家 1# 与参比制剂的杂质谱基本一致，且面积归一化含量相近； 仿制药厂家 2# 与参比制剂相比，杂质谱组成相近，但部分杂质含量差异较大，其中RT=20.807，21.960，29.727 和 30.570min 的杂质峰含量极低或没有，而 RT=19.910，28.267min 的杂质峰相对含量较高。这些差异特征峰还需进一步通过质谱进行定性指认。

 

CAD检测器结果

为保证样品检测上的完整性，实验也通过串联 CAD 检测器，比较仿制药与参比制剂的差异性，结果由图 4所示，RT=21.964,29.752 和 30.570min 的色谱峰为参比制剂与仿制厂家 1# 的共有杂质峰，而仿制厂家 2# 未检测到。且RT=7.671min 杂质峰含量差异也比较显著。表明仿药物与原研制剂存在工艺上的差异。

 

图4  参比制剂 (A)；仿制厂家1#的两种规格(B)、(C)；仿制厂家 2# (D)，在 CAD的叠加谱图

 

辅料的测定

注射用采用原料药物加适量制成。对主成分和辅料含量测定，可保证药物有效性，在《要求》中也明确规定仿制药辅料用量为参比制剂相应辅料用量的95%-105%。USP40 版未对做定量分析，仅有鉴别项；CP2015 版采用离子对色谱法对其进行定量（实际操作较为不便）。另外针对药物成盐率的测定也是保证药物质量的重要内容，而标准方法也不含有相关检查项。

 

本文采用混合基质柱 Trinity-P1，该色谱柱具有阴、阳离子交换和疏水保留等机制，本实验对影响分离的几个关键参数：有机相比例、乙酸铵浓度和方法梯度进行了优化。

 

结果由图5、6 所示，辅料、药物主成分及其成盐离子分离良好。在 10.0-1000.0 µg/mL 范围内， 线性拟合曲线的相关系数 R²大于 0.999，表明其线性相关关系较好，其中10 µg/mL的信噪比为20。图7从辅料、API及其成盐离子的比例上对比了仿制药和原研制剂的一致性。

图5  不同浓度标准品叠加谱图（A）及其响应曲线（B,PF=1.4）

图6  仿制厂家 1# 的 0.5g（A）和 1.0g（B）规格、仿制厂家 2#（C）参比制剂 (D) 在 CAD 上的叠加谱

 

图7  仿制药与参比制剂、主成分和氯离子比例对比

 

结论

本文采用 HPLC-CAD 方法初步对注射用头孢吡肟制剂从杂质谱、辅料含量及其主成分、成盐离子比例等方面对比了仿制药物与参比制剂的一致性。结果采用赛默飞的Trinity P1 混合基质柱结合 CAD 检测器，可同时完成主成分、成盐离子和辅料的分析，另外实验也对比了仿制药和参比制剂的杂质谱，实验后续工作会对差异性较大杂质进行 LC-MS 的定性分析。

 

 

赛默飞以创新发展、合规保驾护航为基本，为仿制药一致性评价中耗时的药学等效性评价(PE)提供快速有效的解决方案，并为生物等效性评价(BE)提供灵活性、稳定性及合规性的智能解决方案，从样品前处理、色谱分离检测、质谱监测、数据管理出发，协助制药企业及技术外包部门以短的时间内完成合规有效的一致性评价过程，以全力推进我国的注射剂一致性评价工作。

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