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什么是赛默飞 7500 荧光定量 PCR 仪？
2024-11-25 阅读(205)
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赛默飞 7500 荧光定量 PCR 仪（Thermo Fisher Scientific 7500 Real-Time PCR System）是一款经典的实时荧光定量 PCR 仪器，广泛应用于基因表达分析、病原体检测、突变筛查、基因分型和药物研发等领域。7500 系列 PCR 仪通过实时监测扩增过程中的荧光信号，精确定量目标核酸的浓度，是分子生物学研究和临床诊断的核心工具之一。
1. 产品简介
赛默飞 7500 荧光定量 PCR 仪以其高灵敏度、高特异性和强大的数据分析能力而受到科研人员的青睐。它支持多种实验类型，包括相对定量、绝对定量、突变分析和熔解曲线检测，能够满足从基础科研到临床诊断的多种需求。
主要特点：
实时检测：实时监控荧光信号，精确定量目标核酸。
多通道检测：支持多色荧光通道，用于多重实验设计。
快速模式：部分型号支持快速运行模式，将实验时间缩短至30分钟。
灵活性强：支持多种荧光染料和探针技术，包括 TaqMan 探针和 SYBR Green。
数据处理能力强：内置软件提供全面的 Ct 值分析、标准曲线绘制和结果输出功能。
2. 技术规格
(1) 光学系统
支持多色荧光检测，标准配置包括 5 个荧光通道：
FAM、SYBR Green、VIC、HEX、ROX 等染料。
灵敏度高，能够精确检测低丰度核酸。
(2) 温控模块
温度范围：4℃ 至 100℃，适应各种实验需求。
温度均匀性：±0.5℃，确保所有样品反应一致。
(3) 运行模式
标准模式：适合所有常规实验。
快速模式：优化热循环流程，将实验时间缩短至 30 分钟。
(4) 反应板支持
96 孔光学反应板，适合中等通量实验室。
(5) 数据采集与分析
实时采集荧光信号，生成扩增曲线、熔解曲线和标准曲线。
数据精确可靠，支持相对定量、绝对定量和基因分型分析。
3. 核心技术与功能
(1) 实时荧光检测
在 PCR 扩增的每个循环中实时检测荧光信号，监控目标核酸的累积量。
荧光信号与目标核酸的初始浓度呈正比，支持精确定量分析。
(2) 荧光检测方法
SYBR Green 染料法：
荧光染料嵌入双链 DNA，发出荧光信号。
优点：实验简单，成本低。
缺点：可能受到非特异性扩增干扰。
TaqMan 探针法：
探针通过荧光基团和猝灭基团的分离发出荧光信号。
优点：特异性高，结果更可靠。
缺点：探针设计和合成成本较高。
(3) 高分辨率熔解曲线分析
熔解曲线分析用于验证扩增特异性，单一峰值表明扩增产物特异性好。
(4) 快速模式
通过优化热循环程序，7500 系列的快速模式可在 30 分钟内完成实验，极大提高了实验室的工作效率。
(5) 智能化数据分析
软件自动生成 Ct 值和标准曲线，并可导出扩增曲线和熔解曲线等实验数据。
4. 工作流程
(1) 样品准备
核酸提取：从样品中提取 DNA 或 RNA，确保纯度和浓度符合实验要求。
逆转录（针对 RNA 样本）：将 RNA 转录为 cDNA。
(2) 配置 PCR 反应体系
配制 PCR 反应液，包括：核酸模板、引物、荧光染料或探针、dNTP、缓冲液和 Taq DNA 聚合酶。
按规定体积分装到 96 孔反应板中，并密封。
(3) 设置实验参数
在软件中选择实验类型（如相对定量、绝对定量或基因分型）。
设置荧光通道和样品信息（样品名称、分组等）。
输入热循环程序，包括变性、退火和延伸阶段的温度和时间。
(4) 运行实验
将反应板放入仪器样品舱，启动实验。
实验运行时，实时采集荧光信号，生成扩增曲线。
(5) 数据分析
实验完成后，使用软件分析 Ct 值、标准曲线、熔解曲线等数据。
输出实验报告或导出数据文件。
5. 应用领域
(1) 基因表达分析
通过实时检测基因的表达水平，用于研究基因调控机制和疾病标志物。
(2) 病原体检测
快速检测病毒和细菌 DNA 或 RNA，用于传染病诊断（如检测）。
(3) 突变筛查
检测基因突变和多态性（SNP），广泛应用于遗传性疾病研究和癌症诊断。
(4) 药物研发
测量特定基因在药物处理下的表达变化，用于筛选药物靶点。
(5) 食品与环境安全
检测食品中的病原体或转基因成分，监测环境样本中的污染物。
6. 优势与特点
高灵敏度与高特异性
光学系统灵敏度高，能够检测低丰度核酸模板。
TaqMan 探针法确保实验结果的特异性。
快速运行
快速模式缩短实验时间，提高实验室效率。
易用性
用户界面友好，支持一键设置和自动化数据分析。
灵活性
兼容多种荧光染料、探针和实验类型，适合多样化实验需求。
可靠性
数据稳定性高，结果重复性好，适合科研和临床应用。
7. 注意事项
样品准备：确保核酸提取的纯度和浓度符合实验要求，避免抑制剂干扰 PCR 反应。
试剂质量：使用新鲜的 PCR 试剂，避免试剂降解导致实验失败。
反应板密封：确保光学反应板密封良好，防止蒸发或气泡干扰荧光检测。
定期维护：清洁光学窗口，校准温控模块，确保仪器性能稳定。
8. 总结
赛默飞 7500 荧光定量 PCR 仪以其强大的检测能力和高效的数据分析功能，为分子生物学研究和临床应用提供了可靠的解决方案。无论是基因表达分析、病原体检测还是药物研发，7500 系列都能满足实验室的多种需求。其快速模式、灵活性和高灵敏度，使其成为科研和诊断领域中广泛应用的经典 PCR 仪器之一。
